PCR(生物學的聚合酶鏈反應)聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。PCR反應技術(shù)的特性介紹:
1、特異性強
決定 PCR 反應特異性的因素有:①引物與模板 DNA 特異分子的正確結(jié)合;②堿基配對原則;③ Taq DNA 聚合酶合成反應的忠實性;④靶基因的特異性與保守性。其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵,它取決于所設計引物的特異性及退火溫度。在引物確定的條件下,PCR 退火溫度越高,擴增的特異性越好。Taq DNA 聚合酶的耐高溫性質(zhì)使反應中引物能在較高的溫度下與模板退火,從而大大增加 PCR 反應的特異性。
2、靈敏度高
從 PCR 的原理可知,PCR 產(chǎn)物的生成是以指數(shù)形式增加的,即使按75%的擴增效率計算,單拷貝基因經(jīng)25次循環(huán)后,其基因拷貝數(shù)也在一百萬倍以上,即可將極微量(皮克級)DNA 擴增到紫外光下可見的水平(微克級)。
3、簡便快速
現(xiàn)已有多種類型的 PCR 自動擴增儀,只需把反應體系按一定比例混合,置于儀器上,反應便會按所輸入的程序進行,整個 PCR 反應在數(shù)小時內(nèi)就可完成。擴增產(chǎn)物的檢測也比較簡單:可用電泳分析,不用同位素,無放射性污染,易推廣。
4、對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總 RNA 均可作為擴增模板??芍苯佑酶鞣N生物標本(如血液、體腔液、毛發(fā)、細胞、活組織等)的 DNA 粗制品擴增檢測。