在ELISA試劑盒檢測中影響血清血漿樣本的因素很多

    在考慮試劑因素和操作因素之外，也應從標本因素方面進行分析。 OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應后，在492nm處有zui高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是HRP結(jié)合物zui常用的底物。OPD本身難溶于水，OPD·2HCL為水溶性。

   曾有報道OPD有致異變性，操作時應予注意。OPD見光易變質(zhì)，與過氧化氫混合成底物應用液后更不穩(wěn)定，須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在試劑盒中，OPD和H2O2一般分成二組分，OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式，片劑中含有發(fā)泡助溶劑，使用更為方便。過氧化氫則配入底物緩沖液中，有制成易保存的濃縮液，使用時用蒸餾水稀釋。先進的ELISA試劑盒中則直接配成含保護劑的工作濃度為0.02% H2O2的應用液,只需加入OPD后即可作為底物應用液。ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些試劑盒所采用。
    另一種HRP的底物為3-（4-羥基）苯丙酸[3-（4-hydroxy）phenly propionic acid,HPPA]，經(jīng)HRP作用后，產(chǎn)物顯熒光，可用熒光光度計測量。用于ELISA的優(yōu)點為可加寬定量測定的線性范圍。
HRP對氫受體的專一性很高，僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物（urea peroxide）。H2O2應用zui多，但尿素過氧化物為固體，作為試劑較H2O2方便、穩(wěn)定。試劑盒供應尿素過氧化物片劑，用蒸餾水溶解后，在底物緩沖液中密閉、低溫（2～8℃）可穩(wěn)定1年。