產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒 |
| 50次/200次/500次 | BJ-01X6526 |
商品詳細(xì)介紹： 產(chǎn)品原理：本產(chǎn)品檢測原理基于碘化丙啶（Propidium, PI）染色方法分析細(xì)胞周期和凋亡。碘化丙啶是一種雙鏈DNA染料，其嵌入雙鏈DNA中可以產(chǎn)生熒光，并且熒光的強(qiáng)度和雙鏈DNA的量成正比。 在細(xì)胞周期中，G0和G1期細(xì)胞有一套染色體，G2和M期細(xì)胞有兩套染色體，S期介于兩者之間。經(jīng)過碘化丙啶染色后，處在不同細(xì)胞周期中的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度是不一樣的。假定G0和G1期的細(xì)胞熒光強(qiáng)度為1，那么G2和M期的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為2，S期的細(xì)胞介于1和2之間。 細(xì)胞凋亡時(shí)，由于細(xì)胞核皺縮和DNA片段化，染色時(shí)DNA片段會(huì)從打孔的細(xì)胞膜處丟失，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，熒光強(qiáng)度小于1，即Sub-G1峰或者凋亡細(xì)胞峰。 細(xì)胞凋亡也可以用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞光散射的變化來檢測。凋亡前期，染色質(zhì)皺縮，細(xì)胞密度增加，前向角光散色顯著降低。凋亡后期，細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體，前向角光散射和側(cè)向角光散色都顯著降低。 產(chǎn)品適用：本試劑盒可用于培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞檢測，也可用于組織細(xì)胞檢測。 保存條件：-20°避光條件下，保存1年以上，4°避光條件下，可以保存2個(gè)月。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明： 1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點(diǎn)： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 Taenia solium鏈狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Murray Valley Encephalitis Virus(MVEV)墨累谷腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Babesia divergens分歧巴貝斯蟲LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Semen arecae檳榔LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Teladorsagia circumcincta環(huán)紋背帶線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Low Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)低致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Pseudomonas syringae pv. tabaci丁香假單胞桿煙草致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Human Endogenous Retroviruses W family (HERV-W)人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒W(wǎng)家族RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 3-4周 Paenibacillus mucilaginosus膠凍樣類芽孢桿PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-3天 Spina gleditsiae皂角刺探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)口蹄疫病毒SAT3亞型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Porcine Transmissible Gasteroenteritis Virus(TGEV)豬傳染性腹瀉病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒大鼠纖連蛋白(FN)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人牙骨質(zhì)蛋白1(CEMP-1)免疫試劑盒*直銷 大鼠Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒*直銷 人乳頭狀瘤病毒抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 英文名稱：Lactose Peptone Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人抗外切體成分10(EXOSC10)抗體免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 梭菌強(qiáng)化瓊脂 英文名稱：Reinforced Clostridium Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人高危型乳頭狀瘤病毒衣殼蛋白L1(HR-HPVL1)抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) ATCC培養(yǎng)基：2693改良Dixon(mDixon) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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