培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

2 ug pProEX-Htb pProEX-Htb 低溫運輸，-20℃保存 0.625-40 ng/ml 人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒

50T 軍團菌16S rRNA基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)  低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL 人NAD依賴性脫乙酰sirtuin-1(SIRT1)ELISA試劑盒

25 T 超微量ATP測試盒(測Na+K-ATPase) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

0.1mL×10 Tuner(DE3) 感受態(tài) Tuner(DE3) Competent Cell -80℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Deoxyribonuclease-1

50mL Aluminum Chloride Solution（氯化鋁溶液）,0.5M   Aluminum Chloride Solution,0.5M   常溫保存 0.156-10 nmol/L ELISA Kit for Human Apolipoprotein C-III

碘伏（液體） Povidone-iodine (liquid) 500g

乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基 Lactobacillus Agar Medium 250g伊紅美藍瓊脂 (EMB)進口、國產(chǎn)Eosin-Methylene Blue Agar弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌(SN標(biāo)準(zhǔn))250

500U Long-Taq DNA聚合 Long-Taq DNA Polymerase -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人粒集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒

2mL dATP溶液，2.5mM dATP Solution -20℃保存 78-5000 pg/mL 人乙醇脫氫(ADH)ELISA試劑盒

50T 藍舌病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human R-spondin-1

300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase（unmodified） -20℃保存 0.78-50 ng/mL 小鼠鈣結(jié)合蛋白(CALB1)ELISA試劑盒

細胞凋亡-Hoechst染色試劑盒纖維二糖-E（CC）瓊脂 英文名稱：Cellobiose-polymyxin E Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人甲酰甲硫(fMet)免疫試劑盒進口、分裝

BairdParker瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱：BairdParker Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

膽酸 ： 81-25-4 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

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