細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：線蟲活體染色液(地衣紅法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6963

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Hepatitis B Virus Pregenomic RNA（HBV pgRNA）乙型肝炎病毒前基因組RNA RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-FRAP1/mTOR(Ser2448)  磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Vibrio spp.弧通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PDEF/SPDEF  上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

Clostridium sporogenes生孢梭（生孢梭狀芽孢桿）PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-3天CCDC52  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus perillae紫蘇子PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周VCP  含纈酪肽蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Lactococcus lactis 乳酸乳球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FEN1  結(jié)構(gòu)特異性核酸FEN1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bacillus larvae幼蟲芽胞桿（美洲蜂幼蟲腐臭?。┨结樂晒舛縋CR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Brn-2  大腦蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Exocarpium citri grandis 化橘紅探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SIRT4/SIR 2 like protein 4  沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Enterococcus durans耐久腸球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周AAK1  AP2關(guān)聯(lián)激1抗體 0.2ml

Tensaw病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Caspase-1(actived P10)  天冬-胱特異性蛋白家族抗體 規(guī)格: 0.1ml

Herba artemisiae scopariae茵陳LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

線蟲活體染色液(地衣紅法)大鼠骨橋素(OPN)免疫試劑盒進口、分裝

人血清淀粉樣蛋白A4(SAA4)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠 SCUBE1 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人醛脫氫7家族,成員A1(ALDH7A1)免疫試劑盒*直銷

大腸菌群培養(yǎng)基（日本） 英文名稱：Coliform Medium（Japan） 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人抗浦肯野細胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)免疫試劑盒進口、組裝

TPY瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：TPY Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人甘露糖凝集素受體(MBLR)免疫試劑盒進口、分裝

缺陷假單胞菌培養(yǎng)液（SLB肉湯） 英文名稱：SLB Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250

人β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)