培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開(kāi)皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開(kāi)，然后剪開(kāi)肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無(wú)用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) =計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

牛蒡子苷;Arctiin 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) GoldCassette-HIS/HIS重組標(biāo)簽蛋白快速檢測(cè)試劑盒(精裝)2次2次、10次

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O- 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： 20mg/支 角質(zhì)素抗體 TDH ELISA Kit L-蘇氨脫酶(TDH)ELISA試劑盒

山椒子;Zeylenone 規(guī)格： 10mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) NCI-H1703(人肺鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

阿魏鈉;Sodium ferulic 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： 20mg 3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框15抗體 CEP350 ELISA Kit 中心體蛋白350kDa(CEP350)ELISA試劑盒

蕓苔素內(nèi)酯 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 化氨基末端激酶1/2/3抗體 PODN ELISA Kit Podocan蛋白(PODN)ELISA試劑盒

褪黑素 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： 20mg 人分泌型免疫球蛋白A IL4I1 ELISA Kit 白介素4誘導(dǎo)蛋白1(IL4I1)ELISA試劑盒

鹽水蘇堿;Stachydrine hy 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) NCI-H838(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

鹽達(dá)克羅寧（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 Dyclonine hydrochloride COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞)中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii

日蟾毒它靈;Gamabufalin 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) 5%糖發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

銀杏內(nèi)酯B 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： 20mg 化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體 COL4α1 ELISA Kit Ⅳ型膠原α1(COL4α1)ELISA試劑盒

強(qiáng)力霉素?？他} 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 Doxycycline Hyclate 人腺腺細(xì)胞英文名稱(chēng)：MDA-MB-415

龜對(duì)照藥材 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： 1g 15號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框58抗體 NOP58 ELISA Kit 核仁蛋白58(NOP58)ELISA試劑盒

重樓皂苷II 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： 20mg 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體 HSP20 ELISA Kit 熱休克蛋白20(HSP20)ELISA試劑盒

PLC/PRF/5(人肝癌亞力山大細(xì)胞)說(shuō)明書(shū)Phospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ連接激酶/T-LAK細(xì)胞源蛋白激酶抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA7/Eph receptor A7  酪氨酸蛋白激酶受體A7抗體 規(guī)格: 0.2ml

NIT1  水解酶1抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM61B/LSM14B  FAM61B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 1mgRCBTB1/CLLD7  鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PTPN7(Ser93)  磷酸化非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-c-Kit(Tyr703)  磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml

BACE1/ASP2  β分泌酶抗體 規(guī)格: 0.1mlSA1/Nuclear protein stromal antigen 1  粘結(jié)蛋白SA1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1mlABI1  ABI1/SSH3BP1蛋白抗體 0.1ml

Phospho-SIRT1(Ser47)  磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Troponin I(Ser23/24)  磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

FBXO38  F-box蛋白38抗體 規(guī)格: 0.2mlCD3/CD3-ε  CD3抗體 規(guī)格: 0.1ml

NNT  煙酰胺核苷酸轉(zhuǎn)酶抗體 規(guī)格: 0.2mlHECA  HECA蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-rat IgM/Bio  生物素標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HSL (Ser865)  磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 規(guī)格: 0.1ml

Jagged 2  Notch配體Jagged 2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

C11orf24  11號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框24抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-DAXX (Ser517)  磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

CNTROB  易感基因2相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPNPLA1  含patatin樣磷脂酶1抗體 規(guī)格: 0.2ml

DcR3/TR6  誘捕受體3抗體 規(guī)格: 0.1mlCadherin 8  鈣粘附蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。