中文名稱(chēng)：MTS細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒

英文名稱(chēng)：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：500次
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X6321

MTS是一種新型甲臜化合物，和MTT同屬四唑氮衍生物。MTS能被活細(xì)胞里的線粒體脫氫酶降解而產(chǎn)生棕黃色水溶性的甲臜，通過(guò)測(cè)定甲臜的光譜吸收，進(jìn)而可以測(cè)定細(xì)胞的增殖情況。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

TM3(小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

TSCCa(人舌鱗癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

U-2 OS(人骨肉瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

U251(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

U-87 MG(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

U-937(人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

V79(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

VCaP(人前列腺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

WI-38(人胚肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

WISH(人羊膜細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

Y1(Y-1) (小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

ZR-75-1(人乳腺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

ZR-75-30(人乳腺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

16HBE(人支氣管上皮樣細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

801-D (人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

A2(人腺樣囊性癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

A-427(人肺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

A-498(人腎癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

A875(人黑色素瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    

肺α/β水解酶蛋白3抗體    

三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體    

三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體    

ADCK1蛋白抗體    

?；Y(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體    

α/β水解酶4抗體    

ADCK2蛋白抗體    

乙醛脫氫酶16家庭A1抗體    

粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體    

乙醇脫氫酶1抗體    

δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體    

肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體    

α2巨球蛋白抗體    

ACCSL蛋白抗體    

甲胎蛋白抗體    

β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體    

星形肌動(dòng)蛋白抗體    

系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體    

磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體    

磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體    

MTS細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體    

磷酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體    

膜粘連蛋白7抗體    

操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
 a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)