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產(chǎn)品展示
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泰勒屬原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒
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產(chǎn)品型號:
50T
產(chǎn)品報價:
產(chǎn)品特點:
泰勒屬原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,從而大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性。
  50T泰勒屬原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒的詳細資料:

產(chǎn)品特點:
1. 泰勒屬原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記:
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量:
內(nèi)標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品名稱

泰勒屬原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Theileria spp.

貨號

BJ-R7275

檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

4,4'-雙[4-(二對甲)乙]聯(lián)分子式:749.01英文名稱:4,4'- bis [4- (two para toluene amino group) styrene:119586-44-6分子量: C56H48N2

5-四氮唑分子式:85.07英文名稱:5- amino tetrazolium:4418-61-5分子量: CH3N5

3-甲-5-(2-羥乙)-4-甲噻唑啉氯英文名稱:3- -5- (2- hydroxy ethyl benzene methyl) -4- methyl thiazole chloride分子式:269.79分子量: C13H16ClNOS:4568-71-2

鄰溴甲分子式:171.04英文名稱:Ortho toluene:95-46-5分子量: C7H7Br

三硼氫鉀溶分子式:282.23英文名稱:Three phenyl boron potassium hydride solution:99747-36-1分子量: C18H16BK

二氫錳分子式:284.94英文名稱:Two manganese phosphate:18718-07-5分子量: Mn(H2PO4)2•2

氯1-羧甲-3-甲咪唑分子式:176.6英文名稱:Chlorinated 1- carboxymethyl -3-:分子量: C6H9ClN2O2

5--2-(三氟甲)并咪唑分子式:201.15英文名稱:5- -2- (three amino methyl fluoride) benzimidazole:3671-66-7分子量: C8H6F3N3

3-氟-4-硝吡分子式:142.09英文名稱:3- -4- nitro pyridine:13505-01-6分子量: C5H3FN2O2

二氧錳分子式:86.94英文名稱:Manganese dioxide:1313-13-9分子量: MnO2

1-Boc-4-分子式:311.16英文名稱:1-Boc-4- iodine piperidine:301673-14-3分子量: C10H18INO2

泰勒屬原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒NCI-H226(人肺鱗細胞)SK-N-MC(人神經(jīng)上皮瘤細胞)

丙二培養(yǎng)基/丙二酸培養(yǎng)基/Malonate Broth用于測定腸道細菌對丙二酸的利用試驗10克國產(chǎn)/進口

HEL(人紅白細胞白血病細胞)HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞

粗柄羊肚菌 Morchella crassipas中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii

BL瓊脂培養(yǎng)基/BL Medium雙岐桿菌分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

酒假絲酵母 Candida kefyrCOS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞)

抗生素Ⅲ號培養(yǎng)基/抗生素3號培養(yǎng)基/Antibiotic Agar NO.3藤黃八疊球菌懸的制備250克國產(chǎn)/進口

玉蜀黍赤霉 Gibberella zeae發(fā)光假蜜環(huán)菌 Armillariella tabescens

人十二指腸腺細胞英文名稱:HuTu-80

BGC823(人胃細胞)5×106cells/瓶×2

甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基/Mannitol Ferment Medium腸道桿菌的鑒別,細菌甘露醇發(fā)酵試驗250克國產(chǎn)/進口

 

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 泰勒屬原蟲通用 探針法 熒光定量PCR試劑盒
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