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產(chǎn)品展示
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榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
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產(chǎn)品型號:
50T
產(chǎn)品報價:
產(chǎn)品特點:
榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,從而大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性。
  50T榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒的詳細資料:

實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品名稱

榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱 
貨號

BJ-R7445

產(chǎn)品特點:
1. 榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記:
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量:
內(nèi)標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

2-氯-3,5-二硝三氟甲分子式:270.55英文名稱:2- -3,5- two nitro three f:392-95-0分子量: C7H2ClF3N2O4

間氟吡分子式:97.09英文名稱:Fluorine pyridine:372-47-4分子量: C5H4FN

5-喹啉分子式:144.17英文名稱:5- amino group:611-34-7分子量: C9H8N2

二環(huán)丙酮英文名稱:Two phenyl ring分子式:206.24分子量: C15H10O:886-38-4

乙龍腦酯英文名稱:Bornyl acetate分子式:196.29分子量:C12H20O2:20347-65-3

玫瑰紅鈉英文名稱:Rose red分子式:214.04分子量: C6Na2O6:523-21-7

豆素498英文名稱:498分子式:319.38分子量: C16H17NO4S:87331-48-4

1,3-二亞胺異吲哚分子式:145.17英文名稱:1,3- two - based:57500-34-2分子量: C8H7N3

腈英文名稱:Benzene acetonitrile分子式:117.15分子量: C8H7N:140-29-4

重氮胺分子式:197.24英文名稱:Heavy nitrogen amino group:136-35-6分子量: C12H11N3

1,2,3-*氧分子式:168.19英文名稱:1,2,3- grade three:634-36-6分子量: C9H12O3

榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒小鼠Ⅱ型肺泡上細胞*培養(yǎng)基100mL

人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

結(jié)腸英文名稱:C26瘤

293ET(人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞))豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vigna

布氏菌選擇性培養(yǎng)基/Brucella Selective Medium布氏菌的選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

小鼠白血病細胞英文名稱:M1

盤孢菌 Gloeosporium sp.Yeast Protein Extraction Reagent/酵母蛋白抽提試劑

小鼠肝外膽管上皮細胞*培養(yǎng)基苜蓿中華瘤菌

小鼠結(jié)締組織纖維細胞香菇 Lentinula edodes

BRL-3A(大鼠正常肝細胞)5×106cells/瓶×2

MKTTN肉湯/MKTTN Broth食品中沙門氏菌檢驗選擇性增菌250克國產(chǎn)/進口

 

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