培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

500mL Krebs-Ringer Solution [Bicarbonate Buffered; w/o Ca++]  Krebs-Ringer Solution [Bicarbonate Buffered; w/o Ca++]  常溫保存氯化鈉B肉湯基礎(chǔ)(SCPB)    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sodium Chloride Polymyxin Broth Base用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)，用前應(yīng)無(wú)菌加入B（SN標(biāo)準(zhǔn)）250

5 g  蛋白去除試劑M Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ryanodine receptor 1

50T 嗜水氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Melanoma-associated antigen C1

250mL HEPES Buffer,1M,pH7.6  HEPES Buffer,1M,pH7.6  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人蛋白激JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2)ELISA試劑盒

250mL Casein Blocking Buffer in PBS（酪蛋白封堵劑）  Casein Blocking Buffer in PBS 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Mannose-binding protein C

根瘤菌培養(yǎng)基  250g 0.94-60 ng/mL 人外基質(zhì)糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒

25mL Bovine Serum Albumin Solution（BSA溶液），1mg/mL Bovine Serum Albumin Solution，1mg/mL 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement C4-B

25g 咪唑 Imidazole 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 26

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板（9cm） Violet Red Bile Agar 10個(gè)/包結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)VRBA250克用于大腸菌群的檢驗(yàn)

30次 一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE套裝（低pH 緩沖液套） One-Stop Protein Native PAGE Pack 常溫保存（上樣液需要-20℃保存） 0.156-10 ng/mL 人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)蛋白2(MASP2)ELISA試劑盒

2 ug pCMV/Myc/Mito pCMV/Myc/Mito 低溫運(yùn)輸，-20℃保存SE增菌液進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Selenite Enrichment Medium250克增殖標(biāo)本中的沙門(mén)氏菌

巴氏染色液(EA36)雞天門(mén)冬氨基轉(zhuǎn)移(AST)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠白介素1受體相關(guān)激1(IRAK1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠血管生成素1(ANG-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠甲狀旁腺激素(PTH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人胰抑制素(Pancreastatin)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

大鼠c-jun 免疫試劑盒*直銷(xiāo)

人神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

革蘭氏染色液 英文名稱(chēng)：Gram Staining 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*8

人柯薩奇病毒A16(CVA16)抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

木糖-明膠培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Xylose - gelatin medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g