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細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)
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細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)公司正在出售的產(chǎn)品:0.125-8 ng/mL 人胰腺αELISA試劑盒 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Angiopoietin-related protein 3 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Podocin 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human C-C
  細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)的詳細(xì)資料:

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱:細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)

英文名稱:Luminescent Cell Viability Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格:100次|500次

產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X6353

本試劑盒是一種通過化學(xué)發(fā)光法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATP含量從而來定量檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)目的試劑盒。本試劑盒的性能和用途與Promega公司的同類產(chǎn)品基本相同,對(duì)于相同的細(xì)胞樣品本試劑盒的發(fā)光效果更強(qiáng)一些。

本試劑盒比常見的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它細(xì)胞活力測(cè)定方法更加簡(jiǎn)單快捷。只需把試劑盒提供的檢測(cè)試劑與培養(yǎng)細(xì)胞等體積混合,反應(yīng)10分鐘后即可進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。無需洗滌細(xì)胞,也無需更換或去除培養(yǎng)液。并且化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定,在反應(yīng)開始后的10分鐘內(nèi)無顯著變化,30分鐘內(nèi)的下降不超過10%。

本試劑盒不僅適合少量樣品的檢測(cè),也非常適合大量樣品的高通量篩選檢測(cè)。

本試劑盒線性范圍廣,檢測(cè)靈敏度高。用96孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí),本試劑盒在0-50,000個(gè)細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度范圍內(nèi)有良好的檢測(cè)效果,并且在僅有幾百個(gè)細(xì)胞時(shí)仍有良好的線性關(guān)系。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量?jī)H為50個(gè)/孔時(shí),發(fā)光強(qiáng)度可達(dá)空白孔的5倍左右。

ATP,作為重要的能量分子,在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP是細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)重要指標(biāo),也是具有代謝活性細(xì)胞的重要標(biāo)志性分子,并和活細(xì)胞數(shù)目成良好的線性關(guān)系。因此,ATP含量能很好地反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目,即本試劑盒可以通過測(cè)定ATP含量來進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)或檢測(cè)細(xì)胞活力。

本試劑盒通過ATP檢測(cè)細(xì)胞活力的原理參考下圖。借助ATP依賴的螢光素酶催化的螢光素發(fā)光反應(yīng),ATP可以通過測(cè)定化學(xué)發(fā)光來進(jìn)行定量。由于ATP含量能很好地反映活細(xì)胞的數(shù)目,而ATP含量和發(fā)光強(qiáng)度成正比,這樣就可以簡(jiǎn)單地通過化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度來計(jì)算出細(xì)胞活力或細(xì)胞數(shù)目。

細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)檢測(cè)ATP的原理圖

對(duì)于96孔板,我們推薦使用100μl細(xì)胞培養(yǎng)液和100μl的檢測(cè)試劑,總體積為200μl,此時(shí)本試劑盒可以進(jìn)行100次檢測(cè)。對(duì)于384孔板,我們推薦使用25μl細(xì)胞培養(yǎng)液和25μl的檢測(cè)試劑,總體積為50μl,此時(shí)本試劑盒可以進(jìn)行400次檢測(cè)。也可以用其它體積的試劑進(jìn)行檢測(cè),但細(xì)胞培養(yǎng)液和檢測(cè)試劑體積的比例必須為1:1。

儲(chǔ)存條件:室溫,有效期2年。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。


QQ截圖20220509112004.png

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

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