操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：尼氏小體染色液 英文名稱：Nissl body Staining Solution 產品規(guī)格：100ml 產品貨號：BJ-01X6606 尼氏體(Nissl body)或稱尼氏小體是分布于神經細胞胞質內的三角形或橢圓形小塊狀物質，能被堿性染料如硫堇、甲藍和焦油紫等染料染成紫藍色。各種神經細胞內都含有尼氏體，但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中，但不在于軸突和包體的軸丘。另外，尼氏體會因為生理狀態(tài)的變化而變化，尼氏體是神經元內合成蛋白質合成的重要部位，當神經元受到刺激后，包體內尼氏體會明顯減少。 尼氏染色液(Nissl Stain，焦油紫法)采用焦油紫(Cresyl violet)作為核心染料，焦油紫具有感光作用，能夠很好地顯示尼氏體變化。主要優(yōu)點是操作簡便、染色穩(wěn)定、適用范圍廣，可用于石蠟組織切片的尼氏物質、神經元等的染色，尼氏體的存在和消失是神經細胞是否受損的重要指標，當發(fā)生腦炎、腦缺血、軸突反應等情況時，尼氏體會發(fā)生溶解甚至消失。 組份： 焦油紫染色液 100mL 分色液 100mL 操作步驟(僅供參考)： 1. 新鮮組織固定于乙醇、Carnoy 固定液或中性福爾馬林溶液后，常規(guī)脫水包埋。 2. 切片厚5μm（注意3），常規(guī)脫蠟至水。 3. 切片入焦油紫染色液中，將染缸置于37℃溫箱浸染10-30min。 4. 蒸餾水沖洗。 5. 入分色液中分化10s-20s，在顯微鏡下觀察至背景接近于無色為止。 6. 無水乙醇迅速脫水。二甲苯透明，中性樹膠封固。 7. 尼氏體:紫色;細胞核:淡紫色;細胞質:淡紫色。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 Cowpea Severe Mosaic Virus(CPSMV)豇豆重花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis鳥分枝桿類結核亞型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Yersinia ruckeri魯氏耶爾森LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 六種致瀉大腸桿六重PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix cyathulae川牛膝PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Carnation Ringspot Virus(CRSV)康乃馨環(huán)駁病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus kochiae地膚子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Marteilia refringens折光馬爾太蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Enterocytozoon hepatopenaei(EHP)蝦肝腸微胞蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Herba houttuyniae魚腥草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Borrelia vincenti奮森疏螺旋體（奮森包柔螺旋體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Xanthomonas campestris pv. vesicatoria野油菜黃單胞辣椒斑點病致變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 尼氏小體染色液牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgG)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒*直銷 雞肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠Wnt-10b蛋白(WNT10B)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠細胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)免疫試劑盒進口、組裝 兔色素上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒*直銷 大鼠果糖胺(FRA)免疫試劑盒進口、分裝 人血小板生成素(TPO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 大鼠2,3-二甘油酸(2,3-DPG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 Tergitol-7瓊脂 英文名稱：Tergitol-7 Agar 產品規(guī)格：250g
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