中文名稱：Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒 英文名稱：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 產品規(guī)格：20次|50次 產品貨號：BJ-01X6331 本試劑盒是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的磷脂酰絲的一種細胞凋亡檢測試劑盒?？梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個細胞樣品。 試劑盒組份： Annexin V-FITC——————100μl Annexin V-FITC結合液———12ml 碘化丙啶染色液——————220μl Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，參與細胞內的信號轉導。但僅Annexin V被報道可以調控一些PKC的活性。 Annexin V選擇性結合磷脂酰絲(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷脂酰絲主要分布在細胞膜內側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷脂酰絲外翻到細胞表面，即細胞膜外側。磷脂酰絲暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷脂酰絲結合后可以阻斷磷脂酰絲的促凝血和促炎癥反應活性。 用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲的外翻這一細胞凋亡的重要特征。 本試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經喪失，Annexin V-FITC可以進入到細胞漿內，與位于細胞膜內側的磷脂酰絲結合，從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。 本試劑盒的流式檢測效果參考圖1和圖2，熒光顯微鏡檢測效果參考圖3。 1.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測細胞凋亡的效果圖。Jurkat細胞未經處理(A)或用10μM(Camptothecin)作用4小時(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細胞儀進行細胞的散射和熒光檢測。從圖中可以看出，經過凋亡誘導劑處理后的細胞，其Annexin V-FITC染色陽性并且PI染色陰性的細胞，即凋亡細胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽性的細胞，即壞死細胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現的細胞點是許可范圍內的檢測誤差。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。 2.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測效果驗證圖。Jurkat細胞用10μM(Camptothecin)作用4小時后，未經染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進行雙染(D)。從圖中可以看出，未經染色的是雙陰性細胞(A)，僅PI染色后出現了預期的PI染色陽性的細胞，僅Annexin V-FITC染色出現了預期的Annexin V-FITC染色陽性的細胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現了預期的僅Annexin V-FITC染色陽性的凋亡細胞和雙陽性的壞死細胞。出現的非預期的細胞點*在許可的誤差范圍內。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。 儲存條件：4℃避光，有效期6個月。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 Haemophilus suis豬嗜血桿染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Semen persicae桃仁探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Rhizoma arisaematis天南星染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Yellow Fever Virus(YFV)黃熱病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Penicillium patulum展開青霉LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Influenza Virus A甲型流感（）病毒H2N2亞型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus tribuli蒺藜染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Trichinella spp.旋毛蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Human Rhinovirus 1B 人鼻病毒1B LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Aeromonas punctata斑點氣單胞探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Mycosphaerella linicola亞麻褐斑病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus tsaoko草果PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液（BGB） 英文名稱：Brilliant Green Lactose Bile Broth 產品規(guī)格：250g 支原體肉湯培養(yǎng)基（不含瓊脂和紅） 英文名稱：Mycoplasma Broth Medium 產品規(guī)格：250g IL-5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 100微克 紙片（30ug/片） 英文名稱：Cephalosporin strip 產品規(guī)格：10片/瓶 YM11瓊脂 英文名稱：YM11 Agar 產品規(guī)格：250g IL-9（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 100微克 NF KAPPA B P50蛋白表達西方雜交分析試劑盒 5次 定量檢測試劑盒 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基（2015藥典） 英文名稱：Getrimide Agar 產品規(guī)格：250g 細胞線粒體復合物II蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 10/20次 通用型LB細培養(yǎng)液 500毫升 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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