細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：維多利亞藍膠原纖維染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×100ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6763

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Jaagsiekte Sheep Retrovirus(JSRV)羊肺腺瘤病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Cdc7  細胞分裂周期蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlAKT3  蛋白激B3 規(guī)格: 0.1ml

Avian Paramyxovirus 3(APMV)禽副粘病毒3型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HSPBAP1  熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlGRM2/GLUR2  促代謝型谷受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Folium mori桑葉染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周TTC23  宮頸原基因8抗體 規(guī)格: 0.2mlCytokeratin 13/CK-HMW  高分子量細胞角蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Giardia lamblia藍氏賈第鞭毛蟲A型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周RIT1  RIT1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTPSB2  肥大細胞類胰蛋白β2 規(guī)格: 0.1ml

Clostridium botulinum肉毒梭狀芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周p53BP1/53BP1  p53結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlSmad4  Smad4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Cortex meliae苦楝皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周NFKBIB/IKB beta  核因子κB抑制蛋白β抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-IKK gamma(Ser43)  磷酸化KB抑制蛋白激γ抗體 規(guī)格: 0.1ml

Trichinella pseudospiralis偽旋毛蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ADAM18  去整合素樣金屬蛋白18抗體 規(guī)格: 0.2mlTestis  瘤抑制基因Testin抗體 規(guī)格: 0.2ml

Porcine Cytomegalovirus (PCMV，同豬皰疹病毒2型)豬巨  病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周AQP3  水通道蛋白-3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Avian Paramyxovirus 1(APMV)禽副粘病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Slc26a5  覺神經(jīng)性耳聾常染色體隱性遺傳61抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus mori桑椹染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周HAUS4/C14orf94  14號染色體開放閱讀框94抗體 規(guī)格: 0.2ml

維多利亞藍膠原纖維染色液人硫酸皮膚素－PG(DSCSPG)免疫試劑盒進口、組裝

BTB培養(yǎng)基 英文名稱：BTB，Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人甲狀旁腺激素1受體(PTH1R)免疫試劑盒進口、分裝

鹽瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：MannitolSalt Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人促?；鞍?/span>(ASP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

芝麻林素 ： Sesamolin 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

人DnaJ同源亞科B成員1(DNAJB1/DNAJ1/HDJ1/HSPF1)免疫試劑盒*直銷

豬αN乙酰葡糖胺糖苷(NAGLU)免疫試劑盒*直銷

牛(SS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠鏈球菌(SK)抗體(IgG)免疫試劑盒進口、分裝

雞催乳素(PRL/LTH)免疫試劑盒*直銷