中文名稱：Alarma Blue細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒 英文名稱：AlamaBlue Cell Viability Assay Kit 產(chǎn)品規(guī)格：500T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6391 AlamaBlue 細(xì)胞活力檢測試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測細(xì)胞活力與毒性的方法。AlamaBlue 通過在細(xì)胞生長的培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的化學(xué)還原反應(yīng)，將非熒光信號的染料轉(zhuǎn)換成為一紅色熒光物質(zhì)，試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），從而檢測細(xì)胞的存活率。維持細(xì)胞需要還原性環(huán)境而抑制生長則表現(xiàn)為氧化型環(huán)境。細(xì)胞生長率相關(guān)的降低可表現(xiàn)為氧化還原指示劑從氧化型（非熒光素、紫色）轉(zhuǎn)為還原型（熒光素、紅色）。該熒光信號可以用530~560nm 的激發(fā)波激發(fā)，在590nm 處可以獲發(fā)射波，檢測570 和600nm 的的吸光度值，校正監(jiān)測值，可以減去相應(yīng)的570nm 和600nm 的背景吸光度值。檢測所產(chǎn)生的熒光信號是與樣品中的活細(xì)胞數(shù)成正比的。 AlamaBlue 細(xì)胞活性檢測試劑盒的靈敏度相似于[3H]胸苷法檢測細(xì)胞增殖法。根據(jù)不同類型的細(xì)胞，AlamaBlue 可以檢測到至少40個(gè)細(xì)胞，同時(shí)保證很好的重現(xiàn)性和靈敏度。作為試鹵靈（紫紅、紅色熒光）可以進(jìn)一步被還原為水解化的試鹵靈（無色、無熒光），當(dāng)細(xì)胞數(shù)量增多，所有的刃天青（7-羥基-3-羰基-10-氧化-三氫吩惡嗪）被轉(zhuǎn)換為試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），試劑盒的信號反而會發(fā)生衰減。因此，對于您所用的試劑盒來說，針對不同的細(xì)胞類型，應(yīng)該調(diào)整您的細(xì)胞數(shù)，做相應(yīng)的優(yōu)化，才能得到更好的結(jié)果。 操作說明 以下操作可用作通用指導(dǎo)建議。考慮不同細(xì)胞類型與培養(yǎng)條件的差異性，有必要根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化您的操作步驟。 1. 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔100μL 培養(yǎng)基飼養(yǎng)細(xì)胞，控制細(xì)胞數(shù)目在40~10000 個(gè)/貼壁細(xì)胞，2000~500000 個(gè)/懸浮細(xì)胞。設(shè)置空培養(yǎng)基做對照。 2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培養(yǎng)基中，37 度孵育：24 小時(shí)（比色法讀數(shù)）；5-6 小時(shí)（熒光讀數(shù)）。 3. 檢測570nm 和600nm 的吸光度，或者用熒光微孔板讀數(shù)530nm 激發(fā)，590nm 發(fā)射波讀數(shù)。 4. 如果采用比色法檢測，選擇OD570-OD600 檢測，如果檢測熒光信號，請?jiān)谛Ｕ齇D 值后，先設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，選擇合適您實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞佳濃度。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細(xì)胞處理： 1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法： 1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Aspergillus ochraceus赭曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)改良安卡拉痘苗病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Monosporascus cannonballus甜瓜黑點(diǎn)根腐病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Chicken Anemia Virus(CAV)雞貧血病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Bartonella henselae漢氏巴爾通體（漢塞巴爾通體、貓抓病、貓抓熱）LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 含麩質(zhì)谷物源性染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Semen allii tuberosi韭菜子PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Mycoplasma fermentans發(fā)酵支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Porcine herpesvirus豬皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Leucocytozoon spp.住白 原蟲屬通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Strongyloides edentatus無齒類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Didymella ligulicola菊花花枯病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Alarma Blue細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古 英文名稱：Modified Lauryl Sulfate Tryptose Broth- VancoMycin 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20支/包 麥芽糖發(fā)酵管（軍團(tuán)菌） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支 植物組織線粒體超氧化物歧化（Mn/Fe SOD）分離試劑盒 50次 冰凍切片組織TSH-BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 抗生素檢定培養(yǎng)基7號 英文名稱：Antibiotic Agar NO.7 產(chǎn)品規(guī)格：250g M-腸道菌瓊脂 英文名稱：M-Enterococcus Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 水楊苷發(fā)酵管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支 C81V培養(yǎng)基 英文名稱：C81V Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 石蠟切片組織CASPASE-1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 冰凍切片TUNEL熒光法（Fluorescein）測定試劑盒 10次 7.5%氯化鈉肉湯培養(yǎng)基（2015藥典） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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