操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 中文名稱:Src/Abl抑制劑(Bosutinib) 英文名稱:Bosutinib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg 產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X7441 Bosutinib是一種新型Src/Abl雙重抑制劑,在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中IC50分別為1.2 nM 和1nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :380843-75-4 別名:SKI-606 純度:99.83% 分子量:530.45 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 Fructus canarii青果LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Omgp 少突細(xì)胞髓磷脂糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SERINC3 絲合并蛋白3抗體(瘤差異表達(dá)蛋白) 規(guī)格: 0.2ml Human Rhinovirus 16 人鼻病毒16 LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周MYLK3 肌球蛋白輕鏈激3抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG 羊抗牛IgG 規(guī)格: 1mg Equine Herpesvirus 4 (EHV-4)馬皰疹病毒4型探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周VAMP-3 囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlC9orf174 9號(hào)染色體開放閱讀框174抗體 規(guī)格: 0.2ml Radix dichroae常山探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Phospho-PBK/TOPK(Thr9) 磷酸化PDZ連接激/T-LAK細(xì)胞源蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA7/Eph receptor A7 酪蛋白激受體A7抗體 規(guī)格: 0.2ml Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周NIT1 水解1抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM61B/LSM14B FAM61B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Classical Swine Fever Virus-WT(CSFV-WT)豬瘟病毒野生株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-rat IgG 小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 1mgRCBTB1/CLLD7 核苷酸交換因子抗體 規(guī)格: 0.2ml Radix aucklandiae木香LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-PTPN7(Ser93) 磷酸化非受體型蛋白酪磷酸7抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-c-Kit(Tyr703) 磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml Arcanobacterium haemolyticum溶血隱秘桿LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BACE1/ASP2 β分泌抗體 規(guī)格: 0.1mlSA1/Nuclear protein stromal antigen 1 粘結(jié)蛋白SA1抗體 規(guī)格: 0.2ml Ureaplasma diversum差異脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1mlABI1 ABI1/SSH3BP1蛋白抗體 0.1ml Src/Abl抑制劑(Bosutinib)CYP3A4/5抑制劑配體(Veledimex) IDO抑制劑(IDO-IN-6) 肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抑制劑(Perhexiline maleate) 腺苷受體激動(dòng)劑(NECA) CYP1A1抑制劑(TMS) GRK抑制劑(CCG215022) p18抑制劑(NSC23005 sodium) PARP-1抑制劑(NMS-P118) 細(xì)胞增殖抑制劑(F16) dipeptidyl peptidase II抑制劑 CYP1A酶抑制劑(Diosmetin)
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