中文名稱：EZH2抑制劑(CPI-1205)

英文名稱：CPI-1205

產品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

產品貨號：BJ-01X8407

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

人類呼吸道合胞病毒 hRSV (subtype A, strain Long) Fusion glycoprotein / RSV-F 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)大鼠縫隙連接蛋白α1,43kDa(GJA1)免疫試劑盒進口、組裝

人類呼吸道合胞病毒 hRSV (subtype A, strain A2) glycoprotein G / RSV-G 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)大鼠封閉蛋白4(CLDN4)免疫試劑盒進口、分裝

人類呼吸道合胞病毒 hRSV (subtype A, strain RSS-2) Fusion glycoprotein / RSV-F 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫試劑盒現貨供應

甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)大鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)免疫試劑盒*直銷

甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (表達載體)大鼠肺炎支原體(MP)抗體免疫試劑盒進口、組裝

甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (表達載體)大鼠肺炎病毒抗體(PV-Ab)免疫試劑盒進口、分裝

甲型流感 H3N2 (A/Wisconsin/67/X-161/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)大鼠肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)免疫試劑盒現貨供應

甲型流感 H6N1 (A/northern shoveler/California/HKWF115/07) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)大鼠肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)免疫試劑盒*直銷

甲型流感 H8N4 (A/pintail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)大鼠肺表面活性物質相關蛋白B(SP-B)免疫試劑盒進口、組裝

甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)免疫試劑盒進口、分裝

甲型流感 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)大鼠肺癌腫瘤抑制因子1(TSLC1)免疫試劑盒現貨供應

EZH2抑制劑(CPI-1205)100次 真菌種屬鑒定 PCR Mix 1（ITS） Fungal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

2 ug pMMB66EH pMMB66EH 低溫運輸，-20℃保存

100次 dNTP和引物清除劑 dNTP-Primer Erasol -20℃保存

1瓶 RTE細胞株 RTE 低溫運輸和保存

哥倫比亞CNA血瓊脂 哥倫比亞血瓊脂 250g

25mL DEAE瓊脂糖凝膠 6B DEAE-Sepharose CL-6B 4℃保存

50T 傳染性非典型肺炎病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

20次 一站式Western印跡套裝（AP顯色試劑） One-Stop Western Blotting Pack 4℃保存

2 ug pYES2NT/B pYES2NT/B 低溫運輸，-20℃保存

50次 柱式土壤DNAout Column Soil DNAOUT 常溫

2 ug pET-21a(+)  pET-21a(+)  低溫運輸，-20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)