操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：EA65染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6711

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

2 ug pGL4.11[luc2P] pGL4.11[luc2P] 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人CD98分子(CD98)ELISA試劑盒

細(xì)菌保存培養(yǎng)基 Bacterial Storage Medium 250g

5mg 羅丹明 123 Rhodamine 123 室溫干燥保存 15.6-1000 pg/mL 羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

50次 沉淀法miRNA分離試劑盒 miRNA Isolation Kit 4℃保存 31.2-2000 pg/mL 人八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子2(OCT2)ELISA試劑盒

含225ml蒸餾水均質(zhì)袋  10個/包 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Secretory carrier-associated membrane protein 1

2 ug pBC-SK pBC-SK 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Pentosidine

腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基(不含瓊脂) Enterotoxin Toxigenic Medium 250g

1瓶 Eca-109（GFP）株 Eca-109（GFP） 低溫運輸和保存 3.12-200 U/L ELISA Kit for Human Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial

250mL Stripping Buffer 3,4X Stripping Buffer 3,4X 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Flotillin-1

2 ug pVLT33 pVLT33 低溫運輸，-20℃保存醋酸鉛培養(yǎng)基  進(jìn)口、國產(chǎn)Lead Acetate Medium用于硫化氫試驗250

50T 百日咳桿菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 U/mL 人丙酮酸激M2型同工(M2-PK)ELISA試劑盒

EA65染色液人胱硫醚β-合(CBS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

沙氏葡萄糖瓊脂 英文名稱：Sabouraud’s Glucose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人白介素6(IL-6)免疫試劑盒*直銷

萊苞迪甙A ： 58543-16-1 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

人25羥基D3(25 HVD3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

小鼠氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

牛β干擾素(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒*直銷

小鼠環(huán)鳥苷(cGMP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

猴甲狀腺素(T4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

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