培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 細胞質(zhì)染色試劑盒-C01 |
| 500T | BJ-01X6664 |
商品詳細介紹: C01細胞質(zhì)染色試劑盒是利用C 系列探針進行細胞質(zhì)染色的試劑盒。本試劑盒中的C01細胞質(zhì)染色探針為綠色熒光標記的細胞質(zhì)探針,具有490/515nm的大激發(fā)/發(fā)射波長。 C系列探針是對活細胞的細胞質(zhì)進行選擇性染色的一類熒光染料,該系列探針可以選擇性標記細胞質(zhì),只需要納摩爾級(nM)濃度即可有效標記活細胞。 C系列探針可自由穿過細胞膜,適用于觀察細胞質(zhì)內(nèi)部生物合成及相關(guān)發(fā)病機理。 C系列細胞質(zhì)探針具有多種顏色可以選擇,可根據(jù)情況對樣品進行多色標記實驗。除了本試劑盒的綠色熒光探針,還可以提供紅色、藍色、橙色等顏色的染色試劑盒。 C01細胞質(zhì)綠色熒光探針有強的疏水性,能夠輕易穿透活細胞膜,進入細胞后,被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子CF,從而被滯留在細胞內(nèi),使胞質(zhì)發(fā)出強綠色熒光。CA 大激發(fā)波長490nm,大發(fā)射波長520nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm 左右,發(fā)射波長為 510~530nm??梢允褂昧魇郊毎麅x或激光共聚焦顯微鏡檢測細胞。 除了針對細胞質(zhì)的C 系列熒光染色產(chǎn)品,還可以為您各種N 系列、M 系列、E 系列、G 系列和L 系列細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒,以及鈣離子、鈉離子、神經(jīng)細胞等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。 儲存條件:染料-20℃避光保存;避免反復凍融;稀釋液2-8℃保存。 有效期:六個月。 |
實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 實驗要點及說明: 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點: 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 25g 果膠 Pectin 室溫干燥保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Pannexin-1 1瓶 3T3株 3T3 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人SAAL1蛋白(Protein SAAL1)ELISA試劑盒 營養(yǎng)瓊脂 Nutrient Agar 250g 2 ug pMUTIN4 pMUTIN4 低溫運輸,-20℃保存 0.1mL×10 TG1化學感受態(tài) TG1 Competent Cell -80℃保存坂崎桿菌顯色培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium用于坂崎桿菌的顯色培養(yǎng),坂崎桿菌顯藍色,其它腸桿菌顯無色。1000ml Campy-Cefex添加劑 Campy-Cefex Supplement 2ml*5 100mg DNase I干粉 DNase I Powder 4℃或-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人Fem-1蛋白同源物A(FEM1a)ELISA試劑盒 200 mL 小鼠內(nèi)皮分離液1.071 Cell Separation Solution -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人扭轉(zhuǎn)蛋白2A(TOR2A)ELISA試劑盒 2 ug pCDM8 pCDM8 低溫運輸,-20℃保存 2 ug pACT-Myd pACT-Myd 低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Protein bassoon 50T 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR) 低溫運輸,-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Angiopoietin-related protein 3 細胞質(zhì)染色試劑盒-C01人apelin 12(AP12)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠載脂蛋白A5(apo-A5)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 牛肝脂(HL)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒*直銷 猴子瘦素(LEP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)免疫試劑盒進口、組裝 山羊口蹄疫抗體(FMDV IgM)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠二胺氧化(DAO)免疫試劑盒進口、分裝 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 鴿子胃動素(MTL)免疫試劑盒*直銷
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