中文名稱:CDK2抑制劑(CVT-313) 英文名稱:CVT-313 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7861 CVT-313是一種有效的ATP-競爭性的選擇性CDK2抑制劑,IC50為0.5μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :199986-75-9 別名:NG26 純度:99.47% 分子量:400.47 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 人 IL17Rb 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬ELISA試劑盒 人 CD47 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬組織因子(TF)免疫試劑盒進口、組裝 人 CD44 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬組織型纖溶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒進口、分裝 人 NLGN1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬組胺(HIS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 人 GRN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬轉鐵蛋白受體(TFR)免疫試劑盒*直銷 人 EpCAM / TROP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬轉鐵蛋白(TF)免疫試劑盒進口、組裝 人 Syk 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬轉錄因子AP-1 免疫試劑盒進口、分裝 人 GranzymeH 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬轉化生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 人 ICAM-2 / CD102 轉錄變體5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ)免疫試劑盒*直銷 人 DCN / Decorin 轉錄變體A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ)免疫試劑盒進口、組裝 人 S100A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽豬主要急性期蛋白(MAP)免疫試劑盒進口、分裝 CDK2抑制劑(CVT-313)酸性固綠染色液 2×50ml 10L Tricine-SDS-PAGE陰極電泳液(干粉) Tricine SDS-PAGE Anode Buffer 常溫保存 精子核蛋白染色液(磷鎢酸法) 25T|50T 2 ug pYES3 pYES3 低溫運輸,-20℃保存 軟骨染色液(阿利新藍法,pH2.5) 2×50ml 50次 柱式水樣DNAout Column Water DNAOUT 常溫 軟骨染色液(阿利新藍法,pH1.0) 2×50ml 2 ug pET-23(+)-TEV pET-23(+)-TEV 低溫運輸,-20℃保存 Unna堿性美藍染色液 100ml LEB肉湯 Listeria Enrichment Broth 250g 透明軟骨染色液(Unna堿性美藍法) 2×50ml 1瓶 3T3細胞株 3T3 低溫運輸和保存 精子核DNA染色液(AO法) 20T 1個 陶瓷研缽 (直徑75 mm) 常溫 軟骨染色液(番紅O法) 2×100ml 50 T 微量丙二醛測試盒/脂質(zhì)過氧化物測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 改良番紅O-固綠軟骨染色液 5×50ml|5×100ml 250mL MES Buffer,1.0M,pH5.0 MES Buffer,1.0M,pH5.0 常溫保存 Goldner三色染色液 6×50ml|6×100ml 100次 哺乳動物種屬鑒定PCR Mix(線粒體CO1基因) Animal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 亞甲基藍-酸性品紅染色液 2×50ml|2×100ml 2 ug pMAL- c2x pMAL- c2x 低溫運輸,-20℃保存 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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