細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：type II CDK2抑制劑(K03861)

英文名稱：K03861

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8187

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

人 FLRT2 基因全長ORF克隆人丁型肝炎病毒抗體(HDV antibody)免疫試劑盒*直銷

人 ATIC 基因全長ORF克隆人丁型肝炎病毒(HDV)抗原免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 AKR1B1 基因全長ORF克隆人丁型肝炎IgM(HDV IgM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 ADRA2B 基因全長ORF克隆人丁型肝炎IgG(HDV IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CCL3 基因全長ORF克隆人丁酰酯(BCHE)免疫試劑盒*直銷

人 CDC25A 基因全長ORF克隆人(AZT)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 IGSF3 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆人調(diào)寧蛋白-1(CNN1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 AKAP7 基因全長ORF克隆人凋亡抑制因子3(BIRC4/API3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 TXNDC17 基因全長ORF克隆人凋亡相關(guān)蛋白激(DAPK)免疫試劑盒*直銷

人 ADSL 基因全長ORF克隆人凋亡相關(guān)半胱肽4(Casp4)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 ALDH3A2 基因全長ORF克隆人凋亡蛋白激活因子1(APAF1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

type II CDK2抑制劑(K03861)DAB顯色試劑盒黃色(IHC)  1Kit  DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC (Yellow Color)50T 水痘帶狀皰疹病毒PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

BCIP/NBT顯色試劑盒藍(lán)紫色(IHC)  1kit  BCIP/NBT Alkaline Phosphatase (AP) Substrate Kit For IHC1 mg SB203580（p38 MAPK抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

DAB顯色試劑盒紫藍(lán)色(WB)  1KIT  DAB Peroxidase Substrate Kit for Western Blot (Purple-Blue Color)250mL Gelatin Veronal Buffer (GVB)   Gelatin Veronal Buffer (GVB)   常溫保存

DAB顯色試劑盒棕黃色(WB)  1KIT  DAB Peroxidase Substrate Kit for Western Blot (Brown-Yellow Color)10uL AP標(biāo)記的抗辛抗體 Anti DIG Ab,AP 4℃保存

抗GST標(biāo)簽瓊脂糖介質(zhì)  100μl|500μl  Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin2 ug pJRD215 pJRD215 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

抗His標(biāo)簽抗體瓊脂糖介質(zhì)  100μl|500μl  Anti-His Mouse Monoclonal Antibody Agarose 醇類中和劑管  9ml*20

抗c-Myc標(biāo)簽抗體瓊脂糖介質(zhì)  100μl  Anti-Myc Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin1瓶 M1細(xì)胞株 M1 低溫運(yùn)輸和保存

YT?免疫組化染色二抗稀釋液  100ml  YT? Secondary Antibody Dilution Buffer for ImmunohistochemistryMPC瓊脂培養(yǎng)基 MPC Agar Medium 250g

YT?免疫熒光染色二抗稀釋液  100ml  YT? Secondary Antibody Dilution Buffer for Immunofluorescence5mg 堿性 ( 大腸桿菌 ) Phosphatase Alkaline（E.coli） -20℃保存

YT?免疫染色一抗稀釋液  100ml  YT? Primary Antibody Dilution Buffer for Immunol Staining100mL TB Solution-III   TB Solution-III   常溫保存

YT?免疫染色封閉液  100ml  YT? Blocking Buffer for Immunol Staining5次 包涵體中量純化試劑盒 Inclusion Body Midiprep Kit 常溫保存（和核酸清除劑需要-20℃保存，包涵體溶解液室溫保存）