產品參數： 中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 產品貨號 | 細胞骨架染色試劑盒-C12 |
| 500T | BJ-01X6668 |
商品詳細介紹： 細胞骨架(cytoskeleton)是真核細胞中由蛋白質聚合而成的三維的纖維狀網架體系。細胞骨架包括微絲、微管和中間纖維。細胞骨架在維持細胞形態(tài)，承受外力、保持細胞內部結構的有序性方面起重要作用。細胞骨架肌動蛋白是球形的、大約42kd的蛋白，在幾乎所有的真核細胞都存在。這是一個非常保守的蛋白，在各物種差異不超過20%。肌動蛋白是兩種細胞內絲狀結構的構成單體：微絲(三種主要的細胞骨架成分之一)，以及細肌絲(是肌肉細胞收縮復合物的一部分)。肌動蛋白參與很多重要的細胞功能，包括肌肉收縮，細胞移動，細胞分裂和胞質分裂、小泡和細胞器的運動、細胞信號，以及細胞連接和細胞形態(tài)的保持和建立。 顯示細胞骨架的常用方法有兩種：骨架蛋白染色法和免疫熒光染色法。骨架蛋白染色法具有簡單易行的特點，但不能區(qū)分骨架蛋白的組成，有些類型的纖維太細,在光學顯微鏡下無法分辨，常用于骨架形態(tài)及完整性研究；免疫熒光染色法可特異顯示骨架蛋白，是用一種微絲解聚抑制劑,它與肌動蛋白纖絲有強親和作用,使肌動蛋白纖絲穩(wěn)定,抑制解聚,且只與F-actin 結合.因此,利用熒光標記可以清晰顯示細胞中微絲的形態(tài),利用熒光顯微鏡對熒光標記的細胞骨架進行觀察,可以得到清晰的實驗結果.具有更普遍的應用意義。 儲存條件：染料-20℃避光保存；稀釋液2-8℃保存。 有效期：六個月。 |
實驗報告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
 實驗要點及說明： 1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。 6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 溴甲紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 Bromcresol Purple Dextrose Peptone 250g改良胰蛋白胨大豆肉湯進口、國產Modified Tryptic Soy Broth250克大腸桿菌O157選擇性增菌 2 ug pLacZ pLacZ 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人腫瘤壞死因子受體超家族成員9 (TNFRSF9)ELISA試劑盒 25mg S(-) 雷氯必利 (+)- 酒石酸鹽 S（-）-Raclopride（+）-Tartrate Salt 室溫保存 9.375-600 pg/mL 人脂肪酸結合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 600次 即用型PCR試劑盒2.0 Instant PCR Kit 2.0 -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人/富有剪接因子2(SRSF2)ELISA試劑盒 1個 痰液采集器 耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基進口、國產耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基250克耶爾森氏菌快速顯色分離培養(yǎng) 2 ug pVitro2-neo-mcs pVitro2-neo-mcs 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人多聚腺苷二核糖聚合2(PARP-2)ELISA試劑盒 250mL Neutralization Solution Neutralization Solution 常溫保存 100g RNGuSCN (異硫酸胍) 常溫 0.156-10 ng/mL 人白相關免疫球蛋白樣受體1(LAIR1)ELISA試劑盒 1.5mL DNA堿性膠上樣液,6× DNAoN for Alkaline Gel -20℃保存 100mL TABS Buffer,0.2M,pH8.5 TABS Buffer,0.2M,pH8.5 常溫保存 1.56-100 ng/mL 人干擾素α/β受體2(IFNAR2)ELISA試劑盒 改良Giolitti-Cantobi肉湯 Modified Giolitti-Cantoni Broth 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Arachidonic acid 細胞骨架染色試劑盒-C12大鼠抵抗素樣α(Retnla)免疫試劑盒進口、組裝 人纖維蛋白原(Fb)免疫試劑盒進口、分裝 植物D3(VD3)免疫試劑盒現貨供應 人核苷化1(UPP1)免疫試劑盒現貨供應 氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（2015藥典） 英文名稱： 產品規(guī)格：250g 人抗表皮細胞基底膜抗體(EBMZ)免疫試劑盒*直銷 玫瑰紅鈉瓊脂平板（9cm） 英文名稱：Rose Bengal Medium 產品規(guī)格：10個/包 人端粒重復序列結合因子2(TERF2)免疫試劑盒進口、組裝 賴脫羧肉湯 英文名稱： 產品規(guī)格：20支 人S100鈣結合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)免疫試劑盒進口、分裝 豬降鈣素基因相關肽(CGRP)免疫試劑盒進口、分裝 |
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