培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 淋巴細(xì)胞分離液1.084 | Lymphocyte separation medium1.084 | 100ml | BJ-01X6546 |
商品詳細(xì)介紹： 淋巴細(xì)胞分離液（Lymphocyte Separation Medium 1.084，簡稱LSM-1.084）是一種無菌的即用型分離液，基于B?yum的Ficoll-甲泛影鈉溶液做過一些改良，使得操作簡單快速且分離效率更高。本品是無菌的聚蔗糖Ficoll/鈉混合溶液，密度為1.084 g/ml，內(nèi)毒素含量很低（＜0.12 EU/ml），是在嚴(yán)格控制的環(huán)境下加工的，條件符合ISO13485:2003標(biāo)準(zhǔn)和GMP認(rèn)證。相對于密度為1.077 g/ml的人淋巴細(xì)胞分離液，本品適用于分離更高密度的人單個核細(xì)胞，包括外周血，臍帶血以及骨髓瘤來源的組織樣本。還適用于分離大小鼠血細(xì)胞，正因為嚙齒動物的淋巴細(xì)胞密度稍高于人淋巴細(xì)胞。 工作原理 去纖維蛋白或抗凝人血以1：1的比例用無菌生理鹽水或稀釋，小心的添加在分離液上層（不要混雜在一起），之后離心30-40min。離心過程中，差速遷移使其終形成幾個不同的細(xì)胞分層： ①聚集在管底的顆粒主要是Ficoll 聚集的紅細(xì)胞以及沉淀物； ②緊挨著上面一層的顆粒主要是粒細(xì)胞，其處于LSM-1.084溶液的滲透壓臨界，具有足夠高的密度遷移穿過LSM-1.084溶液層。 ③單個核細(xì)胞分布在血漿和LSM-1.084分離液的中間層，還包括一些沉降系數(shù)低（密度低）的顆粒，如血小板。 淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞和血小板不具有足夠高的密度穿透LSM-1.084分離液層，因此這些細(xì)胞在血漿和LSM-1.084分離液層聚集形成一個中間分層。吸取中間層，用短暫洗滌，以除去血小板，細(xì)胞分離介質(zhì)和血漿，就可以單個核細(xì)胞。通常情況下，分離所得的細(xì)胞中95±5%為單個核細(xì)胞，細(xì)胞存活率＞90%，回收率為60±20%。 儲存條件：4～8℃，避光 |
實驗報告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 
實驗要點及說明： 1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。 Fasciola hepatica肝片吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Cortex moutan牡丹皮染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Cryptosporidium spp.隱孢子蟲通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Bacillus atrophaeus芽孢桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Actinomyces gerencseriae戈氏放線LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Mycobacterium bovis BCG牛分枝桿卡介苗探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Mycoplasma genitalium生殖支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Human Polyomavirus 6 （HPyV6）人多瘤病毒6 染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Ancylostoma duodenale十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Vibrio alginolyticus溶藻弧LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Rhizoma cynanchi stauntonii白前染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Porcine Torque Teno Virus（PTTV）豬細(xì)環(huán)病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 淋巴細(xì)胞分離液1.084蘆丁 ： 153-18-4 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠整合素α-IIb(Itga2b/CD41)免疫試劑盒進口、分裝 牛胱天蛋白9(Casp-9)免疫試劑盒*直銷 小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 猴組胺(HIS)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)免疫試劑盒*直銷 大鼠腎素(Renin)免疫試劑盒*直銷 山羊生長激素(GH)免疫試劑盒*直銷 大鼠肥大細(xì)胞類胰凝乳蛋白免疫試劑盒進口、組裝 人鋅α2糖蛋白(AZGP1)免疫試劑盒進口、分裝
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