操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：SGLT2抑制劑(Bexagliflozin)

英文名稱：Bexagliflozin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8253

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 WISP1 基因全長ORF克隆人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)免疫試劑盒進口、組裝

人 Angiogenin 基因全長ORF克隆人1型1-鞘氨醇受體(S1P1)免疫試劑盒進口、分裝

人 ALPL / TNAP 基因全長ORF克隆人17-酮類固醇(17-KS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CystatinC / CST3 基因全長ORF克隆人17-羥孕烯醇酮免疫試劑盒*直銷

人 CystatinE / CST6 基因全長ORF克隆人17羥孕酮(17-OHP)免疫試劑盒進口、組裝

人 ACYP2 基因全長ORF克隆人17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)免疫試劑盒進口、分裝

人 PPIA / CYPA 基因全長ORF克隆人17-α-羥化(17-α-OH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CystatinB 基因全長ORF克隆人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)免疫試劑盒*直銷

人 TGF-beta 3 基因全長ORF克隆人15-羥基前列腺素脫氫(15-PGDH)免疫試劑盒進口、組裝

人 CD144 / CDH5 基因全長ORF克隆人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)免疫試劑盒進口、分裝

人 PD-ECGF 基因全長ORF克隆人14-3-3 蛋白 beta/alpha(YWHAB)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

SGLT2抑制劑(Bexagliflozin)Cholesterol myristate  250mg  Cholesterol myristate假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基P Pseudomonas Agar Medium for Detection of Pyocyanin 250g

Ancitabine hydrochloride  1mL(10mM)|200mg|1g  Ancitabine hydrochloride1瓶 HCC38細胞株 HCC38 低溫運輸和保存

THS-044  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  THS-044改良EC（mEC+n）肉湯 Modified EC Enrichment Broth 10ml*20支/包

Aviptadil  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg  Aviptadil250U 核糖核酸HII RNase HII -20℃保存

Uramustine  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Uramustine250mL RIPA Buffer without SDS  RIPA Buffer without SDS  常溫保存

Acriflavine  1mL(10mM)|100mg  Acriflavine1mL Protein A瓊脂糖 Protein A Agarose 4℃保存

Cyclic somatostatin  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg  Cyclic somatostatin2 ug pET-23a(+) pET-23a(+) 低溫運輸，-20℃保存

2-SORA拮抗劑(MK-1064)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  MK-1064李斯特氏菌增菌肉湯（LEB） Listeria Enrichment Broth 250g

N-Acetyl-Calicheamicin  1mg  N-Acetyl-Calicheamicin1瓶 3T6-Swiss albino細胞株 3T6-Swiss albino 低溫運輸和保存

Trabectedin  1mg  Trabectedin50只 專用離心管 (配研磨杵用)   常溫

arylhydrocarbon受體調(diào)節(jié)劑(Galangin)  1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg|100mg  Galangin48 T C 測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存