細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：RAD51抑制劑(RI-1)

英文名稱：RI-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7839

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

遠(yuǎn)志皂苷B

英文名：   Onjisaponin B

英文別名：   presenegenin-(3)-β-D-glucopyranosido-(28)-2-O-[β-D-galactopyranosyl (1→4)-β-D-xylopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl]-3-O-(α-L-rhamnopyranosyl)-4-O-(4

CAS登錄號：   35906-36-6

分子式：   C80H120O39

藤黃酸

英文別名：   1,5-methano-1h,3h,11h-furo(3,4-g)pyrano(3,2-b)xanthene-1-crotonicacid,3a,4,5,;3,3,11-tetramethyl-13-(3-methyl-2-butenyl)-11-(4-7-tetrahydro-8-hydroxy-alph

CAS登錄號：   2752-65-0

分子式：   C38H44O8

分子量：   628.75

雷酚內(nèi)酯

英文名：   Triptophenolide

英文別名：   (3bR,9bS)-3b,4,5,9b,10,11-Hexahydro-6-hydroxy-9b-methyl-7-(1-methylethyl)phenanthro[1,2-c]furan-1(3H)-one

CAS登錄號：   74285-86-2

分子式：   C20H24O3

伏波酯-12-十四烷酸酯-13-乙酸酯

CAS登錄號：   16561-29-8

分子式：   C36H56O8

分子量：   616

分子結(jié)構(gòu)：     

伏波酯-12-惕各酸酯-13-異丁酸酯

CAS登錄號：   92214-54-5

分子式：   C29H40O8

分子量：   516

分子結(jié)構(gòu)：     

Presapogenin CP4

CAS登錄號：   75799-18-7

分子式：   C46H74O15

分子量：   866

分子結(jié)構(gòu)：     

5補(bǔ)充中2

CAS登錄號：   123350-57-2

分子式：   C41H66O12

分子量：   750

分子結(jié)構(gòu)：     

5補(bǔ)充中3

CAS登錄號：   60213-69-6

分子式：   C41H66O12

分子量：   750

分子結(jié)構(gòu)：     

11-羥基柳杉酚

CAS登錄號：   88664-08-8

分子式：   C20H28O3

分子量：   316

分子結(jié)構(gòu)：     

3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇

CAS登錄號：   1352001-09-2

分子式：   C32H52O3

分子量：   484

分子結(jié)構(gòu)：     

蒼耳亭

CAS登錄號：   26791-73-1

分子式：   C15H18O3

分子量：   246

分子結(jié)構(gòu)：     

RAD51抑制劑(RI-1)Hoechst33342染色試劑盒  100T  50T 人外周血AFP mRNA表達(dá)水平PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Rhodamine 123染色試劑盒  100T  1 mg  Forskolin（腺苷酸環(huán)化激活劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

吖啶橙染色試劑盒  100T  500mL Denaturing Solution  Denaturing Solution  常溫保存

Propidium Iodide染色試劑盒  100T  10mL Sephadex G50介質(zhì)  

AO/PI雙染試劑盒  100T  2 ug pIEXBac-c-EGFP-2 pIEXBac-c-EGFP-2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Colchicine  25ml  MiddleBrook7H11瓊脂 Middle Brook 7H11 Agar 250g

Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒  50T|100T  1瓶 Jurkat77細(xì)胞株 Jurkat77 低溫運(yùn)輸和保存

Annexin V-APC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒  50T|100T  TB培養(yǎng)基 TB Medium 250g

Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒  50T|100T  1瓶 EBTr (NBL-4)細(xì)胞株 EBTr (NBL-4) 低溫運(yùn)輸和保存

活細(xì)胞/膜損傷細(xì)胞雙染試劑盒  500T|1000T  250mL Sodium Phosphate Buffer（鈉緩沖液）,0.5M,pH7.0  Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.0  常溫保存

Caspase-3抑制劑Ac-DEVD-CHO  200μl  20µL HRP標(biāo)記的兔抗GST標(biāo)簽多抗 Anti GST-Tag Rabbit PAb,HRP -20℃保存