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產(chǎn)品展示
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鄉(xiāng)土旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
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產(chǎn)品型號(hào):
50T
產(chǎn)品報(bào)價(jià):
產(chǎn)品特點(diǎn):
鄉(xiāng)土旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
  50T鄉(xiāng)土旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒的詳細(xì)資料:

特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鄉(xiāng)土旋毛蟲保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。

產(chǎn)品名稱

鄉(xiāng)土旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Trichinella nativa

貨號(hào)

BJ-R7290

實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。

使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

2-氯-6-甲氧喹啉分子式:193.63英文名稱:2- -6-, a:13676-02-3分子量: C10H8ClNO

4-甲-3-溴吡分子式:172.02英文名稱:4- methyl -3-:3430-22-6分子量: C6H6BrN

N-乙-4-甲酸甲酯分子式:英文名稱:N- ethyl -4- methyl piperidine:分子量:

1,3-二氟分子式:114.09英文名稱:Two - 1,3-:372-18-9分子量: C6H4F2

育亨賓英文名稱:Yohimbine hydrochloride分子式:390.90368分子量:C21H27ClN2O3:65-19-0

三氟甲磺酸銅分子式:361.67英文名稱:三氟甲磺酸銅:34946-82-2分子量: C2CuF6O6S2

1-甲-4-(三丁錫)-1H-吡唑分子式:371.14868英文名稱:1- methyl -4- (three butyl tin) -1H- pyrazole:179055-21-1分子量: C16H32N2Sn

2--4-氯嘧分子式:129.55英文名稱:2- amino -4-:3993-78-0分子量: C4H4ClN3

2,5-二氟溴分子式:192.99英文名稱:2,5- two fluorine bromine:399-94-0分子量: C6H3BrF2

奧達(dá)唑分子式:249.27英文名稱:Up to:20559-55-1分子量: C12H15N3O3

考馬斯亮藍(lán)R250英文名稱:Kaumas blue R250分子式:825.97分子量: C45H44N3NaO7S2:6104-59-2

鄉(xiāng)土旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒血平板 (成品培養(yǎng)基) 規(guī)格: 20個(gè)/盒 用途: 用于營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)

氨芐青霉素麥康凱瓊脂基礎(chǔ) 規(guī)格: 250g 用途: 用于致病性嗜水氣單胞菌的選擇性分離培養(yǎng)(SN/T 0751-2010)

AtT-20(小鼠垂體瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

小鼠晶狀體上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Li-7(人肝細(xì)胞)人淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基

糙皮側(cè)耳 Pleurotus ostreatus小白鼠肺成纖維樣細(xì)胞

鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重組蛋白英文名稱:Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)

Hacat(人永生角質(zhì)形成細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

UVM添加劑/UVM Supplement添加到HB4195中,用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)10毫升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

MDA-MB-157(人腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人胎盤羊膜細(xì)胞*培養(yǎng)基臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereus

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 鄉(xiāng)土旋毛蟲 探針法 熒光定量PCR試劑盒
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