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產(chǎn)品展示
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剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
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產(chǎn)品型號:
50T
產(chǎn)品報價:
產(chǎn)品特點:
剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
  50T剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒的詳細資料:

特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)剛地弓形蟲保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。

產(chǎn)品名稱

剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Toxophasma gondii

貨號

BJ-R7278

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

4-溴-3-硝甲分子式:216.03英文名稱:4- -3- nitro toluene:5326-34-1分子量: C7H6BrNO2

3-甲-4-溴吡唑分子式:161英文名稱:3- methyl -4-:13808-64-5分子量: C4H5BrN2

3-甲吡氧物分子式:109.13英文名稱:3- methyl pyridine oxide:1003-73-2分子量: C6H7NO

paryleneHT分子式:352.227英文名稱:HT parylene:3345-29-7分子量: C16H8F8

菲分子式:179.22英文名稱:Phenanthridines:229-87-8分子量: C13H9N

5-惡唑分子式:145.16英文名稱:5- phenyloxazoline:1006-68-4分子量: C9H7NO

1-*-4-甲咪唑分子式:324.42英文名稱:1- three -4- methyl group:82594-80-7分子量: C23H20N2

靛紅英文名稱:Isatin分子式:147.13分子量: C8H5NO2:91-56-5

1,3-雙(4-氟甲酰)分子式:322.3英文名稱:Double 1,3- (4- - benzoyl) benzene:108464-88-6分子量: C20H12F2O2

9-溴吖分子式:258.11332英文名稱:9- bromide acridine:4357-57-7分子量: C13H8BrN

1-(4-甲氧)乙炔-4-正戊分子式:278.39英文名稱:1- (4-, -4-) - based acetylene - based acetylene group:39969-28-3分子量: C20H22O

剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂/YGC瓊脂/YGC Agar食品中霉素及酵母菌總數(shù)測定250克國產(chǎn)/進口

茜素-β-半糖苷瓊脂/Aliz-Gal Agar用于食品、飲料和飲用水中大腸菌群快速檢測和計數(shù)250克國產(chǎn)/進口

大鼠腸上細胞*培養(yǎng)基100mL

Hepa 1-6, 小鼠肝細胞

OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細胞)鏈霉菌 Streptomyces sp.

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae酸球菌 Lactococcus lactis

酸桿菌肉湯培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 用途: 用于維生素檢測菌種的培養(yǎng)基

抗生素Ⅴ號培養(yǎng)基/抗生素5號培養(yǎng)基/Antibiotic Agar NO.5抗生素微生物的效價測定250克國產(chǎn)/進口

VE(人血管內(nèi)皮細胞)5×106cells/瓶×2

Myc標簽蛋白裂解卵巢

蘇云金芽胞桿菌勵木亞種 Bacillus thuringiensis subsp. tochigiensis鞘氨醇桿菌屬 Sphingobacterium sp.

產(chǎn)品相關關鍵字: 剛地弓形蟲 探針法 熒光定量PCR試劑盒
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