實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鏈球菌屬通用保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

B-甲吡分子式：英文名稱：B- methyl pyridine：分子量：

5-乙酰-2-甲吡分子式：135.16316英文名稱：5- acetyl -2-：36357-38-7分子量： C8H9NO

棗仁皂苷A英文名稱：Jujuboside A分子式：1207.35136分子量：C58H94O26：55466-04-1

4-溴三氟硼酸鉀分子式：262.9英文名稱：4- Bromophenyl three kbf4：374564-35-9分子量： C6H4BBrF3K

全氟辛磺酸鉀分子式：538.22英文名稱：Perfluorooctanesulfonic acid potassium：2795-39-3分子量： C8F17KO3S

3,5-二甲-1,2,4-三唑分子式：97.12英文名稱：3,5- two -1,2,4- three：7343-34-2分子量： C4H7N3

4-三氟甲氧氟分子式：180.1英文名稱：4- three fluorine methoxy fluorobenzene：352-67-0分子量： C7H4F4O

巖白菜素英文名稱：Bergeninum分子式：328.27144分子量：C14H16O9：477-90-7

蒽醌英文名稱：Anthraquinone分子式：208.22分子量： C14H8O2：84-65-1

2-萘酚-6,8-二磺酸二鉀分子式：380.48英文名稱：Two -6,8- two 2- naphthol sulfonic acid potassium：842-18-2分子量： C10H6K2O7S2

性藍(lán)EA英文名稱：Acid blue EA分子式：792.85分子量： C37H34N2Na2O9S3：2650-18-2

鏈球菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒Toll樣受體2(TLR2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Toll Like Receptor 2 (TLR2)

戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus瘤菌 Rhizobium sp.

氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)/Aeromonas Medium Base(Ryan)氣單胞菌分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

香菇 Lentinula edodesHCC94(人子宮鱗細(xì)胞（高分化）)

香菇 Lentinula edodes酸球菌 Lactococcus lactis

人非小細(xì)胞肺細(xì)胞英文名稱：NCI-H1299

半固體瓊脂 規(guī)格： 250g 用途： 供細(xì)菌動力觀察、菌種保存等用(GB 4789.4－2010和GB/T4789.8－2008)。

C4-2(人前列腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

斯氏油脂酵母 Lipomyces starkeyiRN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元

胰蛋白胨/胰化蛋白胨/TryptoneBR250/500克國產(chǎn)/進(jìn)口

Nitsch培養(yǎng)基/Nitsch MediumBR10升國產(chǎn)/進(jìn)口