產(chǎn)品特點(diǎn): 1. 布魯塞爾德克酵母探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增; 2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘; 3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。 在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。 特異性熒光標(biāo)記: TaqMan法 TaqMan探針的特性: (1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等 (2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q) (3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光 (4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針 相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量: 內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 產(chǎn)品名稱 | 布魯塞爾德克酵母探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Dekkera bruxellensis | 貨號 | BJ-R6615 |
檢測步驟: 一、 試劑的準(zhǔn)備 從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。 設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表: 試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量 熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 總量 15 µL N×15µL (1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。 7.2 qPCR反應(yīng)條件 將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。 推薦循環(huán)條件: 1循環(huán) 50℃ for 2 min 預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec 在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 PCR實(shí)驗(yàn)步驟 典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是: 將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈; 人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短; 耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。 以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品: Murashige & Skoog*培養(yǎng)基 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶/片劑 糞便細(xì)菌DNA分離試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次 植酸待測樣品處理試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 細(xì)胞組蛋白H3-K4甲基化熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20 次 動(dòng)物源性食品鼠源基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 通用型HRP-DAB底物顯色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次 二酯酶(Phosphodiesterase;PDE) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:0.25單位 胰蛋白酶抗原修復(fù)溶 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50毫升 OXALATE(氨)血抗凝 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:100毫升 組織賴氨酸羥化酶(lysyl hydroxylase)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 免疫細(xì)胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB*間接檢測試劑盒(含一抗和HRP二抗) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次 血影細(xì)胞膜尼羅紅熒光染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 布魯塞爾德克酵母探針法熒光定量PCR試劑盒十六烷基*基溴銨瓊脂/假單胞菌屬選擇瓊脂/Cetrimide Agar用于綠膿桿菌的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口 BT-549(人腺管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 UM-UC-3(人膀胱移行細(xì)胞)MG-63, 人骨肉瘤細(xì)胞 H-97(人高轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞)中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii PA-1(人卵巢腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞英文名稱:U251 瘤菌 Rhizobium sp.紅曲霉 Monascus anka NCI-H716(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae微小威斯桿菌 Weissella minor 線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶70A(TOMM70A)重組蛋白英文名稱:Recombinant Translocase Of Outer Mitochondrial Membrane 70A (TOMM70A) 異常漢遜酵母 Hansenula anomala瑞士桿菌 Lactobacillus helveticus |