操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據分析——結果交付——售后服務。 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 卡奇谷病毒RT-LAMP試劑盒價格 | RT-LAMP kit for karchi Valley virus | BJ-P987639 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 1g釀酒酵母Human SMURF2(E3 ubiquitin-protein ligase SMURF2) ELISA Kit 5g嗜酸乳桿菌Human SERBP1 (Plasminogen activator inhibitor 1 RNA-binding protein) ELISA KIT 1g香菇Human CAPN15 (Calpain-15) ELISA KIT 5g平臍儒孢菌Human SGIP1 (SH3-containing GRB2-like protein 3-interacting protein 1) ELISA KIT 10MG冬蟲夏草Human SH3BP5L (SH3 domain-binding protein 5-like) ELISA KIT 250mg釀酒酵母Human SETX (Probable helicase senataxin) ELISA KIT 1g哈茨木霉Human SHCBP1 (SHC SH2 domain-binding protein 1) ELISA KIT 1g藍綠小四孢菌Human SAV1 (Protein salvador homolog 1) ELISA KIT 250mg釀酒酵母Human IREB2(Iron-responsive element-binding protein 2) ELISA Kit 1g枯草芽孢桿菌Human RFNG (Beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase radical fringe) ELISA KIT 250mg短雙歧桿菌Human SASH1(SAM and SH3 domain-containing protein 1) ELISA Kit 1g西班牙糖絲菌Human SASH3 (SAM and SH3 domain-containing protein 3) ELISA KIT 1g匍枝根霉原變種Human RHO (Rhodopsin) ELISA KIT 5g桂花地霉Human RBPMS2 (RNA-binding protein with multiple splicing 2) ELISA KIT 100ml竹喙球菌Human SERGEF (Secretion-regulating guanine nucleotide exchange factor) ELISA KIT 1g黃柄曲霉Human SELPLG (P-selectin glycoprotein ligand 1) ELISA KIT 25g鮭色鎖擲酵母Human ALOX15B(Arachidonate 15-lipoxygenase B) ELISA Kit 卡奇谷病毒RT-LAMP試劑盒價格phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體磷酸二氫雙(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)鋇 水合物Human ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit phospho-c-Jun (Thr93) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體長春胺環(huán)烷羧酸Human HTRA1 (HtrA Serine Peptidase 1) ELISA Kit phospho-c-Jun (Ser63) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體鹽酸咪達普利環(huán)烷羧酸Human IL10Rβ (Interleukin 10 Receptor Beta) ELISA Kit Jun B 活化蛋白激酶B抗體鹽酸艾司洛爾環(huán)烷羧酸Human IGF1R (Insulin Like Growth Factor 1 Receptor) ELISA Kit Jun D 活化蛋白激酶D抗體磷酸哌喹L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽Human HYOU1 (Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit CK I alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶抗體瑞格列奈L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽Human IAA (Insulin Autoantibody) ELISA Kit CK II Alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶抗體鹽酸伐昔洛韋L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽Human ICAM4 (Intercellular Adhesion Molecule 4) ELISA Kit CK II alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶抗體奧美拉唑鈉3-羧基苯磺酸Human IDE (Insulin Degrading Enzyme) ELISA Kit |