PCR反應五要素: 參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。 設計引物應遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 參數(shù)規(guī)格: 產品名稱:莢膜阿耶羅菌LAMP試劑盒說明書 英文名稱:Lamp kit for Yersinia CAPSULARIS 貨號:BJ-P987449 產品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 產品特點: 本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。? 產品特點: ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增; ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝; ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測; ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。 樣品要求及注意事項: 1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細胞:5×106動植物,酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。 4、 實時熒光定量PCR服務您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。 儲存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。 8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。 三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 10mg假單胞菌屬Human KIF1C ELISA Kit 10MG葡萄座腔菌Human KIF20A ELISA Kit 1g膠孢Human KIAA1191 ELISA Kit 25g洋蔥伯克霍爾德氏菌Human KIAA1468 ELISA Kit 5g乳粉 乳酸菌計數(shù) Human CEMIP(Cell migRation-inducing and hyaluronan-binding protein) ELISA Kit 1g德氏乳桿菌德氏亞種Human KIAA1429 ELISA Kit 5g波蘭青霉Human KIAA1530 ELISA Kit 200mg枯草芽孢桿菌Human KIAA1602 ELISA Kit 5g三寶壟根霉Human KIDINS220 ELISA Kit 100g淺黃微桿菌Human KIAA0430 ELISA Kit 25g松杉靈芝Human KIAA1984 ELISA Kit 5g釀酒酵母Human EFCAB14(EF-hand calcium-binding domain-containing protein 14) ELISA Kit 100g大腸埃希菌Human KDM2A ELISA Kit 25g紅色紅曲霉Human KCNJ5 ELISA Kit 500g黑曲霉Human KCNJ15 ELISA Kit 10g貝萊斯芽胞桿菌Human KCNJ3 ELISA Kit 250g新疆溶桿菌Human KCNJ1 ELISA Kit 莢膜阿耶羅菌LAMP試劑盒說明書FB2配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、氯化鋰)支氣管上皮細胞培養(yǎng)基小氣道上皮細胞ICAD(Inhibitor of Caspase-Activated DNase ) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑(抗原) Fraser/Half Frase/FB1添加劑(A和B)小氣道上皮細胞培養(yǎng)基肺成纖維細胞IDE 胰島素降解酶(抗原) FB2添加劑骨骼肌細胞培養(yǎng)基支氣管平滑肌細胞IGF-1 R 人胰島素樣生長因子-I受體 Fraser肉湯/FB2基礎上皮細胞培養(yǎng)基小氣道平滑肌細胞IGFBP-5 ( Insulin-like Growth Factor Binding Protein 5、IBP5) 胰島素樣生長因子結合蛋白-5(抗原) Half Fraser肉湯/FB1基礎上皮細胞培養(yǎng)基-2氣管平滑肌細胞Isulin 胰島素(抗原) BLEB基礎動物上皮細胞培養(yǎng)基支氣管成纖維細胞APC(Activated protein C) APC活化蛋白C抗原 UVM培養(yǎng)基腎系膜細胞培養(yǎng)基心房肌細胞Apelin 脂肪炎癥因子Apelin抗原 LPM瓊脂基礎尿道上皮細胞培養(yǎng)基心室肌細胞Apelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原 注意事項: 1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。 4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。 |