它具有下列特點(diǎn): 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 登革病毒型RT-LAMP試劑盒圖片 | RT-LAMP kit for dengue virus | BJ-P987777 |
? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點(diǎn) (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對(duì)原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。 (3) 簡(jiǎn)便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲(chǔ)存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 5g肉色迷孔菌(可訂)Human CD3d(Cluster of Differentiation 3d) ELISA Kit 100g大腸埃希菌Human SLC22A2 ELISA Kit 25g極長(zhǎng)鏈霉菌Human SLC25A1 ELISA Kit 5g木醋桿菌Human SLC1A4 ELISA Kit 1g巴斯德畢赤酵母Human SLC25A11 ELISA Kit 5g釀酒酵母Human SLC19A3 ELISA Kit 1g紫色孢囊桿菌Human SLC25A3 ELISA Kit 5g無Human SLC20A1 ELISA Kit 1g釀酒酵母Human SLC38A1 ELISA Kit 1mg膠凍樣芽胞桿菌Human SLC25A34 ELISA Kit 10g枯草芽孢桿菌Human SLC25A33 ELISA Kit 100g平田頭菇6-2Human SLC25A45 ELISA Kit 25g藤黃毛殼Human ATP6AP2(Renin receptor) ELISA Kit 500g焦曲霉Human SLC27A2 ELISA Kit 5g釀酒酵母Human SLC25A46 ELISA Kit 1g雜色云芝Human SLC27A3 ELISA Kit 5g桔青霉Human RHOC(Rho-related GTP-binding protein RhoC) ELISA Kit 登革病毒型RT-LAMP試劑盒圖片Phospho-LATS1 (Thr1079) 磷酸化腫瘤抑制基因LATS1抗體對(duì)乙酰氨基苯甲雙(二苯基膦)Human HLA-A (Leukocyte Antigen A) ELISA Kit Phospho-LATS1 (Ser909) 磷酸化腫瘤抑制基因LATS1抗體庚烷磺酸鈉(1S,2S,5S)-2-(羥甲基)-5-乙烯基奎寧環(huán)Human PKCη (Protein Kinase C Eta ) ELISA Kit L-Citrulline L-瓜氨酸抗體3-乙氧基-4-羥基苯甲(1S,2R,5R)-2-(羥甲基)-5-乙烯基奎寧環(huán)Human UCP-1 (Uncoupling Protein 1, Mitochondrial) ELISA Kit Lck/p56-LCK 淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶抗體2-2-羥基-6-甲基吡Human IL18BP (Interleukin 18 Binding Protein) ELISA Kit Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶抗體諾氟沙星2-羥基-6-甲基吡Human MHCG (Major Histocompatibility Complex Class I G) ELISA Kit LDL 低密度脂蛋白抗體環(huán)沙星1,3-二溴-5-(三氟甲氧基)苯Human TYR (Tyrosinase) ELISA Kit LDL-R 低密度脂蛋白受體抗體洛美沙星1,3-二溴-5-(三氟甲氧基)苯Human NFκB2 (Nuclear Factor Kappa B2) ELISA Kit ox-LDL 氧化低密度脂蛋白抗體依諾沙星二甲基二硫代氨酸 水合物Human FGL1 (Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對(duì)照,測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 |