操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 馬內(nèi)菲青霉LAMP試劑盒 | Penicillium marneffei lamp Kit | BJ-P988399 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 網(wǎng)孢麻孢菌Anti-SLC22A18 Antibody 橙蓋傘Anti-SLC24A1 Antibody 中國油脂酵母Anti-SLC24A3 Antibody 釀酒酵母Anti-SLC24A4 Antibody 淡紫擬青霉Anti-SLC24A4 Antibody 葡萄座腔菌Anti-SLC25A21 Antibody 卵孢白僵菌Anti-SLC25A11 Antibody 金黃色葡萄球菌金黃亞種Anti-SLC25A31 Antibody 真姬菇Anti-SLC25A12 Antibody 阿利坎特港富鹽菌Anti-SLC25A27 Antibody 枯草芽胞桿菌Anti-SLC25A6 Antibody 地衣芽胞桿菌(未復核可換ACCC06149)Anti-SLC27A4 Antibody 放射形根瘤菌Anti-SLC27A5 Antibody 棘殼孢屬Anti-SLC26A3 Antibody 異常威克漢姆酵母Anti-SLC27A5 Antibody 大豆慢生根瘤菌Anti-SLC28A2 Antibody 短短小芽胞桿菌Anti-SLC28A2 Antibody 馬內(nèi)菲青霉LAMP試劑盒雙皮層蛋白結構域蛋白DCDC2抗體Porcine OXA (Orexin A) ELISA Kit 神經(jīng)干細胞樹突調(diào)節(jié)蛋白DAGLα抗體Porcine ANG I (Angiotensin I) ELISA Kit 對接蛋白4抗體Porcine SPARC (Secreted Protein Acidic And Rich In Cysteine) ELISA Kit DULLARD蛋白抗體Porcine α1BG (Alpha-1-B-Glycoprotein) ELISA Kit 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MNB抗體Porcine Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit 無胸腺癥相關蛋白DGCR6/迪格奧爾格綜合征關鍵基因6抗體Porcine OxLDL (Oxidized Low Density Lipoprotein) ELISA Kit 朊蛋白DPL抗體Porcine KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit 肌強直性營養(yǎng)不良蛋白激酶抗體Porcine P27 (P27 Protein) ELISA Kit |