操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 不明血吸蟲LAMP試劑盒 | Lamp kit for unknown Schistosoma | BJ-P988588 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 產(chǎn)氨短桿菌Acinetobacter calcoaceticus Rhizobium cellulosilyticum Paracoccus denitrificans 球托霉菌屬w5菌株Alcaligenes faecalis subsp. faecalis 庫德里阿茲威氏畢赤酵母Pseudoalteromonas citrea 枯草芽孢桿菌Pseudoalteromonas atlantica 釀酒酵母Pseudoalteromonas carrageenovora 木霉(加詞待譯)Lactobacillus acidophilus 運動節(jié)桿菌Lactobacillus acidophilus 龍勝鏈霉菌Streptococcus thermophilus 植物乳桿菌Halorubrum saccharovorum Aurantimonas altamirensisHalorubrum lacusprofundi 腸桿菌Halorubrum sodomense 牛絲膜菌Halorubrum coriense 淺黃色假單胞菌Burkholderia cepacia 釀酒酵母Brevundimonas diminuta 云芝栓孔菌(變色栓菌)Burkholderia cepacia 灰略紅鏈霉菌Alkaliphilus transvaalensis 不明血吸蟲LAMP試劑盒G激酶錨定蛋白1抗體Monkey MAO (Monoamine Oxidase) ELISA Kit DNA修復蛋白GIYD2抗體Monkey ELN (Elastin) ELISA Kit 生長抑制和分化相關蛋白抗體Monkey Cav-1 (Caveolin-1) ELISA Kit 生發(fā)中心相關核蛋白MCM3抗體Monkey LCA/CD45( Leukocyte Common Antigen) ELISA Kit 葡萄糖-6磷酸脫氫酶抗體Monkey PKP2 (Plakophilin 2) ELISA Kit 眼發(fā)育相關基因蛋白ODAG抗體Monkey RPA-70 (replication protein A) ELISA Kit 特異性囊腫病液體蛋白15Monkey GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit 特異性囊腫病液體蛋白15Monkey NKB (Neurokinin B) ELISA Kit |