PCR反應五要素: 參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。 設計引物應遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 參數(shù)規(guī)格: 產(chǎn)品名稱:肝片吸蟲病通用LAMP試劑盒說明書 英文名稱:Universal lamp kit for Fasciola hepatica 貨號:BJ-P987887 產(chǎn)品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。? 產(chǎn)品特點: ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增; ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝; ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測; ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。 樣品要求及注意事項: 1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細胞:5×106動植物,酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。 4、 實時熒光定量PCR服務您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。 儲存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。 8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。 三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 100g大腸埃希菌Human NR1H2(Oxysterols receptor LXR-beta) ELISA Kit 25g球孢白僵菌Human UBR4(E3 ubiquitin-protein ligase UBR4) ELISA Kit 25g類布氏乳桿菌Human CRYAB(Alpha-crystallin B chain) ELISA Kit 5g礦泉水 鈣、鎂、、鈉、鍶、硒、偏硅酸 Human GLB1(Beta-galactosidase) ELISA Kit 1g栗疫菌Human CAV1(Caveolin-1) ELISA Kit 25g巴氏醋桿菌Human HPR(Haptoglobin-related protein) ELISA Kit 5g釀酒酵母Human TALDO1(Transaldolase) ELISA Kit 1g假交替單孢菌Human PSG3(Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 3) ELISA Kit 120mg日本慢生根瘤菌Human FABP4(Fatty acid-binding protein, adipocyte) ELISA Kit 1g運動節(jié)桿菌Human ELANE(Neutrophil elastase) ELISA Kit 250mg鄉(xiāng)間布丘氏菌Human COL4A1(Collagen alpha-1(IV) chain) ELISA Kit 1g葉點霉屬Human NUCB2(Nucleobindin-2) ELISA Kit 5g鹽古桿菌Human RLN3(Relaxin-3) ELISA Kit 1g布魯氏菌 生物Ⅱ型Human IL5RA(Interleukin-5 receptor) ELISA Kit 5g中性彎曲嗜酸菌Human S100A16(Protein S100-A16) ELISA Kit 100g產(chǎn)朊假絲酵母Human ELANE(Neutrophil elastase) ELISA Kit 25g黑木耳Human RRM1(Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit) ELISA Kit 肝片吸蟲病通用LAMP試劑盒說明書SEL1L SEL1L抗體化木蘭花堿2 - 二苯基膦-2' - (N組,n -二基) - 聯(lián)苯Mouse AT (anti-Trypsin) ELISA Kit Selenoprotein W 硒蛋白W抗體(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷2 - 二苯基膦-2' - (N組,n -二基) - 聯(lián)苯Mouse aZP (anti-Zona Pellucida Antibody) ELISA Kit Sema3A 臂板蛋白3A抗體 1,2-二氯烷標準品 : 78-87-5 250mg乙酸(1S,2R)-2-[N-芐基-N-(*苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反應用試劑]Mouse ACF (Apobec 1 Complementation Factor) ELISA Kit Sema3F 臂板蛋白3F抗體 1,3-二氯烯 標準品 : 542-75-6 250mg乙酸(1R,2S)-2-[N-芐基-N-(*苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反應用試劑]Mouse APO-A1 (Apolipoprotein A1) ELISA Kit Sema4C 臂板蛋白4C抗體 1-萘乙酸 86-87-3 1g(1R,2R,5R)-(+)-2-羥基-3-蒎酮Mouse ApoB (Apolipoprotein B) ELISA Kit Sema6A Sema6A抗體 2-(1-萘)乙酰胺 標準品 :86-86-2 1g(1R,2R,5R)-(+)-2-羥基-3-蒎酮Mouse APO-C1 (Apolipoprotein C1) ELISA Kit Sema7A/CD108 軸突生長因子CD108抗體2,2-DPA 茅草枯 標準品 :75-99-0 250mg3-溴-1,8-萘二甲酸酐Mouse APO-C4 (Apolipoprotein C4) ELISA Kit SFRP1 分泌型卷曲相關蛋白1抗體2,4,5-T 2,4,5-涕標準品 : 93-76-5 250mg3-溴-1,8-萘二甲酸酐Mouse APO-E (Apolipoprotein E) ELISA Kit 注意事項: 1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。 4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。 |