PCR反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。 設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 參數(shù)規(guī)格: 產(chǎn)品名稱:唾液乳酸桿菌LAMP試劑盒 英文名稱:Salivary Lactobacillus lamp Kit 貨號:BJ-P988155 產(chǎn)品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。? 產(chǎn)品特點: ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增; ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝; ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測; ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。 樣品要求及注意事項: 1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。 4、 實時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細(xì)信息。 儲存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。 8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 5g產(chǎn)氣莢膜梭菌 毒素C型Anti-SPI1 Antibody 10g乳桿菌Anti-SPN Antibody(原貨號PB0114) 25g紫丁香蘑Anti-SPRY4 Antibody 5g嗜熱鏈球菌Anti-SPTLC1 Antibody 25g芽胞桿菌Anti-SQSTM1 Antibody 5g谷氨酸棒桿菌Anti-SPTLC1 Antibody 1g釀酒酵母Anti-SRC Antibody 25g涎沫假絲酵母Anti-SRC Antibody(原貨號PB0080) 5g英諾克李斯特菌Anti-SRC Antibody 10gAnti-SRG2 Antibody 25g爪哇根霉Anti-SQSTM1 Antibody 250mg枯草芽孢桿菌Anti-SRD5A1 Antibody 100g陳華癸氏中間根瘤菌Anti-SRG4 Antibody 25g季也蒙有孢漢遜酵母Anti-SRCIN1 Antibody 1g構(gòu)巢曲霉Anti-SRI Antibody 5g草木樨中華根瘤菌Anti-SRI Antibody 100mg雅致小克銀漢霉Anti-SRP1/KPNA1 Antibody 唾液乳酸桿菌LAMP試劑盒phospho-IkB beta (Ser23)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化KB抑制蛋白β抗體IgG鈣結(jié)合蛋白樣39抗體Rat TRAIL R1 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand 1) ELISA Kit IL-1 Alpha /FITC 熒光素標(biāo)記白介素1α抗體IgG癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子3抗體麥芽六糖Rat TRAIL R3 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand 3) ELISA Kit IL-1 Beta/FITC 熒光素標(biāo)記白介素1β抗體IgG20號染色體開放閱讀框31抗體麥芽七糖Rat TRAIL R4 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand 4) ELISA Kit IL-1ra/FITC 熒光素標(biāo)記白介素-1受體拮抗劑抗體IgG成簇相關(guān)蛋白1抗體三氟甲磺酸釹Rat TRAIL/TNFSF10 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand) ELISA Kit IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、豬、牛、羊、犬白介素-1受體拮抗劑抗體IgG腫瘤/抗原2抗體三氟甲磺酸釹Rat TP53 (Tumor Protein 53) ELISA Kit IL-1R I /FITC 熒光素標(biāo)記白介素1受體Ⅰ抗體IgG腫瘤/抗原1B(S)-2-哌啶酮-6-羧酸Rat TSGF (Tumor Specific Growth Factor/Tumor Supplied Group of Factor) ELISA Kit IL-1R II /FITC 熒光素標(biāo)記白介素1受體Ⅱ抗體IgG皮膚T細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達抗原6)(S)-2-哌啶酮-6-羧酸Rat TYR (Tyrosinase) ELISA Kit IL1RAPL1 /FITC 熒光素標(biāo)記白介素受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白抗體IgG腫瘤/抗原3抗體2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲Rat TRK B (Tyrosine Kinase B) ELISA Kit 注意事項: 1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結(jié)果。 4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。 |