服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | (RT-)牛皰疹病毒型LAMP試劑盒 | (RT -) lamp kit for bovine herpesvirus | BJ-P987594 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 25g細極鏈格孢Human NUDT1(7,8-dihydro-8-oxoguanine triphosphatase) ELISA Kit 5g黑曲霉Human KIRREL(Kin of IRRE-like protein 1) ELISA Kit 25g煙曲霉Human LYPD3(Ly6/PLAUR domain-containing protein 3) ELISA Kit 5g乳桿菌屬Human MAP1LC3A(Microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3A) ELISA Kit 1g側耳Human UACA(Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats) ELISA Kit 5g戴爾根霉Human WIF1(Wnt inhibitory factor 1) ELISA Kit 100g第三梭菌Human MAP1LC3B(Microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3B) ELISA Kit 25g棒曲霉Human IFIH1(Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1) ELISA Kit 500g毛木耳Human NUDT1(7,8-dihydro-8-oxoguanine triphosphatase) ELISA Kit 1g銅綠假單胞菌Human KIRREL(Kin of IRRE-like protein 1) ELISA Kit 250mg大腸埃希氏桿菌Human FOLR2(Folate receptor beta) ELISA Kit 5g路德酵母Human B4GALT5(Beta-1,4-galactosyltransferase 5) ELISA Kit 10MG藍色犁頭霉Human CAMKK2(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2) ELISA Kit 5g貪噬菌屬Human CBLB(E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B) ELISA Kit 5MG賴氨酸芽孢桿菌Human CD5L(CD5 antigen-like) ELISA Kit 1g奇異球菌Human FAM3B(Protein FAM3B) ELISA Kit 1g膠紅酵母Human MYOF(Myoferlin) ELISA Kit (RT-)牛皰疹病毒型LAMP試劑盒BRMS-1 癌轉移抑制基因1抗體氯噻酮氯銥酸水合物Human MIP-1β (Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta) ELISA Kit Brucella 布氏桿菌菌體蛋白抗體鄰位甲酚氯銥酸水合物Human RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit BSA 牛血清白蛋白抗體硫唑嘌呤乙酰乙酸叔丁酯Human MCP-3 (Monocyte Chemotactic Protein 3) ELISA Kit BSEP 膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體萘普生乙酰乙酸叔丁酯Human ECF/CCL11 (Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA Kit Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗體潑尼松乙酰乙酸叔丁酯Human TARC (Thymus Activation Regulated Chemokine) ELISA Kit BTG2/TIS21 B細胞遷移基因2抗體青蒿琥酯(S)-3-異基-2,5-哌二酮Human MIP-3α (Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit BTK/ATK 蛋白酪氨酸激酶ATK抗體右美沙芬BOC-N-甲基-L-氨酸Human SLC (Secondary Lymphoid Tissue Chemokine) ELISA Kit Phospho-Btk(Ser180) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體BOC-N-甲基-L-氨酸Human MDC (Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |