服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 禽腎炎病毒2型RT-LAMP試劑盒說明書 | RT-LAMP kit for avian nephritis virus type 2 | BJ-P987509 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 1g白色茶樹菇Human ECM2 ELISA Kit 250mg大腸埃希氏菌Human DTX3L(E3 ubiquitin-protein ligase DTX3L) ELISA Kit 1g猴頭菌—50043Human E2F4 ELISA Kit 25g米羅布里格小單孢菌Human E2F7 ELISA Kit 5g米曲霉Human EDAR ELISA Kit 5ml蘇云金芽孢桿菌Human EDC3 ELISA Kit 25g大腸埃希菌Human EDC4 ELISA Kit 5g西西布哈加瓦氏菌Human CXCL17 ELISA Kit 1g谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032Human DEFB121 ELISA Kit 5g米根霉Human DNAJB11 ELISA Kit 1g慢生根瘤菌Human CTRP6 ELISA Kit 250mg變異短波單胞菌Human DNAJB4 ELISA Kit 25g多粘芽孢桿菌Human Cyclin T1 ELISA Kit 1g美澳型核果褐腐病菌Human DNAJB(DnaJ homolog subfamily B member 8) ELISA Kit 5g黑曲霉Human CYGB(Cytoglobin) ELISA Kit 100mg平菇Human Cytohesin 1 ELISA Kit 500mg蛹蟲草Human DOCK180 ELISA Kit 禽腎炎病毒2型RT-LAMP試劑盒說明書1%亞碲酸鹽溶液人內根殼細胞微小RNA檸檬酸鎂九水合物URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal 肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原 lurite Solution人淋巴內皮細胞微小RNABexaroteneBeta-HCG (Human chorionic gonadotropin Beta) 人beta 亞基人絨毛膜促性腺激素抗原 L-EMB瓊脂(伊紅美藍瓊脂)人淋巴成纖維細胞微小RNA1535-65-5Alpha-HCG(Human chorionic gonadotropin Alpha ) 人α亞基人絨毛膜促性腺激素多肽抗原 Eosin Methylene Blue Agar, Levine人口腔角質細胞微小RNA1535-65-5HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human 膀胱腫瘤抗原 腦心浸液人牙齦成纖維細胞微小RNAD-薄荷CD36L1/SRB1 peptide 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原 Brain Heart Infusion人牙周膜成纖維細胞微小RNAD-薄荷HER2 receptor(NT)(erbB-2 isoform 2 receptor N-Terminus) c-erbB-2受體抗體(N端) 50170人食道上皮細胞微小RNAD-薄荷HER2 receptor(NT)(erbB-2 isoform 2 receptor N-Terminus) c-erbB-2受體抗原(N端) 50171人食道平滑肌細胞微小RNA2-(三氟甲氧基)苯胺HGF(hepatocyte growth factor) 肝細胞生長因子抗原 操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |