服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 封閉毛細(xì)線蟲LAMP試劑盒 | Closed Capillaria lamp Kit | BJ-P987671 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點 (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 100mgpBIFC-VC155Human FYB (FYN-binding protein) ELISA KIT 100mg南方靈芝Human FYN (Tyrosine-protein kinase Fyn) ELISA KIT 25mg大腸埃希氏菌Human FMNL3 (Formin-like protein 3) ELISA KIT 1g岸濱芽孢桿菌Human FMNL2 (Formin-like protein 2) ELISA KIT 25g福士擬莖點霉Human FGFRL1 (Fibroblast growth factor receptor-like 1) ELISA KIT 5g盤菌屬Human FANK1 (Fibronectin type 3 and ankyrin repeat domains protein 1) ELISA KIT 1g西班牙糖絲菌Human FIGLA (Factor in the germline alpha) ELISA KIT 5g中國臺灣根霉Human FSD1 (Fibronectin type III and SPRY domain-containing protein 1) ELISA KIT 1g葡萄汁酵母Human FERMT2 (Fermitin family homolog 2) ELISA KIT 5g黏液桿菌屬Human FNDC1 (Fibronectin type III domain-containing protein 1) ELISA KIT 100g豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS23Human FTHL17 (Ferritin heavy polypeptide-like 17) ELISA KIT 25g釀酒酵母Human FERMT3 (Fermitin family homolog 3) ELISA KIT 500g擬康氏木霉Human FBRS (Probable fibrosin-1) ELISA KIT 1g米曲霉Human FSCB (Fibrous sheath CABYR-binding protein) ELISA KIT 1g大球蓋菇Human FERMT3 (Fermitin family homolog 3) ELISA KIT 25g釀酒酵母Human FTHL17 (Ferritin heavy polypeptide-like 17) ELISA KIT 5g大腸埃希菌Human FBRS (Probable fibrosin-1) ELISA KIT 封閉毛細(xì)線蟲LAMP試劑盒DP-I 橋粒斑蛋白1抗體反二酸(富馬酸)Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionate)ytterbium(III),Yb(FOD)3Human CHD5 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 5) ELISA Kit DP-II 橋粒斑蛋白2抗體荊芥油Erlotinib HCl (OSI-744)Human CgA (Chromogranin A/Pancreastatin) ELISA Kit DVL1 蓬亂蛋白1抗體生姜油ErlotinibHuman NEF3 (Neurofilament 3) ELISA Kit Dynamin 2 酶動力蛋白2抗體莪術(shù)油CP-335963Human NEFL (Neurofilament, Light Polypeptide) ELISA Kit Nadrin Dysbindin抗體八角茴香油N-琥珀酰亞胺基-N-甲基氨酸酯Human /nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit Dysferlin Dysferlin蛋白抗體魚腥草油N-琥珀酰亞胺基-N-甲基氨酸酯Human C-jun (V-Jun Sarcoma Virus 17 Oncogene Homolog) ELISA Kit E2F1 轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體牡荊油2--5-溴嘧啶Human CC16 (Clara Cell 16kD protein) ELISA Kit E2F2 轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體小茴香油2--5-溴嘧啶Human CLDN1 (Claudin 1) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |