它具有下列特點(diǎn): 1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒(méi)有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 牛傳染性鼻氣管炎病毒LAMP試劑盒說(shuō)明書 | Lamp kit for infectious bovine rhinotracheitis virus | BJ-P988113 |
? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點(diǎn) (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對(duì)原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。 (3) 簡(jiǎn)便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。 (4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲(chǔ)存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 5mg蘋果*(可換成cfcc 7946)Anti-PI-16/PI16 Antibody 25ml矩圓黑盤孢Anti-PI3 Antibody 5ml米曲霉Anti-PI3K-gamma/PIK3CG Antibody 100g大腸埃希菌Anti-PIAS1 Antibody 25g淺黃鏈霉菌Anti-PIAS1 Antibody 100g蕈青霉Anti-PIAS2 Antibody 25g寄生曲霉Anti-PIAS3 Antibody 500g球孢白僵菌Anti-PIAS4 Antibody 5gAchromobacter piechaudiiAnti-PICALM Antibody 25ml深綠木霉Anti-PIAS4 Antibody 5ml棒桿菌Anti-PIGR Antibody 1g木腐裂褶病菌Anti-PIGR Antibody 5g毛韌革菌Anti-PIK3CA Antibody 50ml邊緣假單胞菌防風(fēng)致病變種Anti-PIK3CB Antibody 1gCompostimonasAnti-PIK3CA Antibody 5g球孢白僵菌Anti-PIK3R2 Antibody 25ml香菇(神農(nóng)5號(hào))Anti-PIK3R1 Antibody 牛傳染性鼻氣管炎病毒LAMP試劑盒說(shuō)明書phospho-GAB2 (Tyr452) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體IgG細(xì)胞球蛋白抗體BOC-β-氨酸Rat (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1) ELISA Kit phospho-GAB2 (Tyr643) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化接頭蛋白Gab2抗體IgG周期素D1抗體BOC-β-氨酸Rat NOX4 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 4) ELISA Kit phospho-GAB2 (Ser623) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體IgG周期素D2抗體BOC-β-氨酸Rat NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) ELISA Kit GAD-65/FITC 熒光素標(biāo)記谷氨酸脫羧酶-65抗體IgG周期素E抗體N'-Cbz-L-鳥(niǎo)氨酸Rat N-ACHR (Nicotinic Acetylcholine Receptor) ELISA Kit GAD-65(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記谷氨酸脫羧酶-65抗體(C端多肽)IgGNK細(xì)胞表面抑制性受體CD94抗體N'-Cbz-L-鳥(niǎo)氨酸Rat NT-proBNP (N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit GAD-67 /FITC 熒光素標(biāo)記谷氨酸脫羧酶-67抗體IgG淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-3抗體2-甲氧基-5-磺酰胺苯甲酸甲酯Rat PIIINP (N-Terminal Procollagen III Propeptide) ELISA Kit GADD34/FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因34抗體IgG皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子抗體多肽試劑TCTURat NFIL3 (Nuclear Factor, Interleukin 3 Regulated) ELISA Kit GADD45/FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因45抗體IgG補(bǔ)體C3a過(guò)敏毒素抗體多肽試劑TCTURat NF-κB (Nuclear Factor Kappa B)ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無(wú)菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無(wú)菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照,測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 |