PCR反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。 設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 參數(shù)規(guī)格: 產(chǎn)品名稱:牛皮蠅蛆LAMP試劑盒 英文名稱:Lamp kit for hypodermia 貨號:BJ-P988108 產(chǎn)品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。? 產(chǎn)品特點: ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增; ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝; ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測; ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。 樣品要求及注意事項: 1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。 4、 實時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。 儲存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。 8. 如果有 N 個樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 100g戊糖乳桿菌Anti-PAX3 Antibody 25g雅致小克銀漢Anti-PAX4 Antibody 5g雙鞘不黏柄菌Anti-PAX5 Antibody 25ml擬莖點霉Anti-PAX6 Antibody(原貨號PB0821) 5ml巨型艾美耳球蟲Anti-PCDH15 Antibody 25ml亞熱帶細(xì)小鏈孢菌Anti-PAX8 Antibody 5ml金黃色葡萄球菌Anti-PBK Antibody 1g溜曲霉Anti-PCK1/PEPC Antibody 250mg中國臺灣根霉Anti-PCK2 Antibody 1g肉糜 鵝源性成分(定性)Anti-PCSK1 Antibody 5g淡紫擬青霉Anti-PCSK4 Antibody 1g皮落青霉Anti-PCSK9 Antibody 25g杏鮑菇Anti-PCSK6 Antibody 5g葉球鞘氨單胞菌Anti-PCSK9 Antibody 100g類肺炎克雷伯氏菌類肺炎亞種Anti-PDCD10 Antibody 25g松口蘑Anti-PDCD1 Antibody 1g速生桿菌Anti-PDCD1 Antibody 牛皮蠅蛆LAMP試劑盒FOS B/FITC 熒光素標(biāo)記FosB抗體IgG周期素依賴性激酶8抗體4-三氟甲酰氯Rat MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit FOSL1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗FOSL1抗體IgG周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體4-三氟甲酰氯Rat MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit FOSL2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗FOSL2抗體IgGⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體4-三氟甲酰氯Rat MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit FOXJ1/HFH-4/FITC 熒光素標(biāo)記抗插頭蛋白J1抗體IgGc-fos抗體4-三氟甲酰氯Rat MMP-8 (Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit FOXO1/FOXO1A/FITC 熒光素標(biāo)記叉頭轉(zhuǎn)錄因子O1抗體IgG嗜鉻粒素A抗體N-Boc-N'-三苯甲基-L-組氨酸Rat MMP-9 (Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族抗體IgGCGRP降鈣素基因相關(guān)肽抗體N-Boc-N'-三苯甲基-L-組氨酸Rat ANG (Angiogenin) ELISA Kit Phospho-FoxO1 (Ser319) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgGChAT膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶抗體5-甲氧基-2-萘滿酮Rat ANG1 (Angiopoietin 1) ELISA Kit Phospho-FoxO1 (Ser256) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgG細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體5-甲氧基-2-萘滿酮Rat SLC (Secondary Lymphoid Tissue Chemokine) ELISA Kit 注意事項: 1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實驗結(jié)果。 4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。 |