特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。 2. 根據(jù)短古柏線蟲保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。 3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。 4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。 5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。 6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。 儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。 產(chǎn)品名稱 | 短古柏線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Cooperia curticei | 貨號 | BJ-R6578 |
![](https://img80.afzhan.com/gxhpic_54238ff3b6/bb33f2c9b6dc3b858a1591d37c4e0f2d6d16a17191bdd6b7695da9b6ff5ea23740b8af6011d82a40.jpg)
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。 使用方法: 一、樣品采集: 1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。 2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。 3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。 4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。 一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例) 1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。 2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。 4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用 6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 原理: 所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 檢測方法 1.SYBRGreenⅠ法: 在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。 SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖 PCR產(chǎn)物熔解曲線圖 2.TaqMan探針法: 探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。 通用型禽霍亂(Pasteurella multocida;PM)基因檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 細胞GRK4激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 革蘭氏陽性細菌基因組DNA純化試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 副傷寒沙門氏菌B(Salmonella Paratyphi B)標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:2次 植物脂肪酸合成酶(fatty acid synthase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 冰凍切片DNA分離試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次 副傷寒沙門氏菌A(Salmonella Paratyphi A)標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:2次 細胞CDK6/CYC D1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 人體Cyclin A1基因甲基化檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhi)標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:2次 組織CDK2/CYCLIN A激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 酶解法PCR清潔試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 短古柏線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒乙鉀分子式:84.16英文名稱:Potassium ethanol:917-58-8分子量: C2H5KO 種菌唑分子式:333.861英文名稱:Species of bacteria:125225-28-7分子量: C18H24ClN3O 5-氯喹哪分子式:178.64英文名稱:5- chloroquine 8-hydroxyquinadine:4964-69-6分子量: C10H9NCl 3-溴-2-氯-5-硝吡分子式:237.44英文名稱:3- -2- -5- nitro pyridine:5470-17-7分子量: C5H2BrClN2O2 1-甲萘分子式:142.2英文名稱:1- methyl naphthalene:90-12-0分子量: C11H10; C10H7CH3 甲砜分子式:156.2英文名稱:Benzene methyl:3112-85-4分子量: C7H8O2S 雙二異丙氯磷英文名稱:BIS two amino acid分子式:266.793分子量: C12H28ClN2P:56183-63-2 啉胍英文名稱:Guanidine hydrochloride分子式:207.66分子量: C6H14ClN5O:3160-91-6 五英文名稱:Pentachlorophenol分子式:266.34分子量: C6HCl5O:87-86-5 蟲草素英文名稱:Cordyceps分子式:251.24分子量:C10H13N5O3:73-03-0 二甲砜分子式:94.13英文名稱:Two methyl group:67-71-0分子量: C2H6O2S |